| 文件名：潔凈室沉降菌檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 | 文件編號(hào)：ZL/SOP/ZK/02200 | |||||||
| 制定人： | 日期：?????年??月??日 | 文件類型：工作標(biāo)準(zhǔn) | ||||||
| 審核人： | 日期：?????年??月??日 | 版???次：第一版 | ||||||
| 批準(zhǔn)人： | 日期：?????年??月??日 | 印???數(shù)：共5份 | ||||||
| 生效日期：??????????????????????????年??月??日 | 頒發(fā)部門：綜合辦公室 | |||||||
| 分發(fā)至： 質(zhì)量副總經(jīng)理、質(zhì)量管理部、QC檢驗(yàn)室、綜合辦公室 | ||||||||
| 變更記載 | 修訂號(hào) | 修訂人 | 批準(zhǔn)日期 | 生效日期 | 原 因 及 目 的 | |||
⒈ 目的：建立沉降檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，用以規(guī)范員工的檢測(cè)操作。
⒉ 范圍：適用于公司內(nèi)部生產(chǎn)潔凈區(qū)內(nèi)的沉降菌檢測(cè)工作
⒊ 責(zé)任：生產(chǎn)部、生產(chǎn)車間、質(zhì)量管理部、QC檢驗(yàn)室主任、檢驗(yàn)員對(duì)本規(guī)程的執(zhí)行負(fù)責(zé)。
⒋ 檢測(cè)依據(jù)：YY/T0188.6－1995藥品檢驗(yàn)操作規(guī)程，第6部分，藥品生物測(cè)定法。
⒌ 內(nèi)容：
5.1?設(shè)備：高壓消毒鍋、恒溫培養(yǎng)箱；
5.2?培養(yǎng)基及平皿制備：
5.2.1?培養(yǎng)皿：一般采用￠90mm×15mm的硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。
5.2.2?培養(yǎng)基一般采用普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基或其它藥典認(rèn)可的培養(yǎng)基。
5.2.3?將培養(yǎng)皿置于121℃濕熱滅菌20分鐘或于180℃干熱滅菌2小時(shí)。
5.2.4將培養(yǎng)基加熱溶化，冷至45℃時(shí)，在無(wú)菌操作要求下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。
5.2.5?待瓊脂凝固后，將培養(yǎng)基平面倒置于30～35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，若培養(yǎng)基平面上確無(wú)菌落生長(zhǎng)，即可供采樣用。
5.2.6?制備好的培養(yǎng)基平面宜在2～8℃的環(huán)境中存放。
5.3?采樣點(diǎn)：
5.3.1?采樣點(diǎn)的布置力求均勻，避免采樣點(diǎn)在某局部區(qū)域過(guò)于集中，按照潔凈區(qū)的面積大小，而制定最少采樣點(diǎn)數(shù)目，在滿足最少測(cè)點(diǎn)數(shù)的同時(shí)，還宜滿足最少培養(yǎng)皿數(shù)。
最少采樣點(diǎn)數(shù)目
| 面積m2 | 潔凈度級(jí)別 | ||||||
| 100 | 10000 | 100000 | |||||
| <10
10≤～＜20 ≥20 |
2～3
4 8 16 40 80 160 400 800 |
2
2 2 4 10 20 40 100 200 |
2
2 2 2 3 6 13 32 63 |
||||
| 注：表中的面積，對(duì)于單向流潔凈室，是指送風(fēng)面積，對(duì)于非單向流潔凈室，是指房間面積。 | |||||||
| 潔凈度級(jí)別 | 所需￠90mm培養(yǎng)皿數(shù)（以沉降0.5小時(shí)計(jì)） | 沉降菌/皿 | |||||
| 100
10000 100000 300000 |
14
2 2 |
1
3 5 15 |
|||||
5.3.2?工作區(qū)采樣點(diǎn)的位置離地0.8米～1.5米左右（略高于工作面）。并在關(guān)鍵設(shè)備或關(guān)鍵工作活動(dòng)范圍處增加采樣點(diǎn)。
5.3.3?測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)
潔凈區(qū)微生物監(jiān)控的靜態(tài)標(biāo)準(zhǔn)(a)如下：
| 級(jí)別 | 沉降菌( 90mm) | 頻次 |
| cfu／0.5小時(shí)(b) | ||
| ? 100級(jí) | ≤1 | 1次ㄍ月 |
| ? 10000級(jí) | ≤3 | 1次ㄍ月 |
| ? 100000級(jí) | ≤10 | 1次ㄍ月 |
潔凈區(qū)微生物監(jiān)控的動(dòng)態(tài)標(biāo)準(zhǔn)(a)如下：
| 級(jí)別 | 沉降菌( 90mm) | 頻次 | 表面微生物 | 頻次 | |
| cfu／0.5小時(shí)(b) | 接觸碟( 55mm)
cfu／碟 |
5指手套
cfu／手套 |
|||
| 100級(jí) | ≤1 | 1次ㄍ天 | <l< p=””></l<> | <1 | 1次ㄍ班 |
| 10000級(jí) | ≤3 | 1次ㄍ天 | —— | —— | —— |
| 100000級(jí) | ≤10 | 1次ㄍ周 | —— | —— | —— |
5.4?測(cè)試規(guī)則
5.4.1?測(cè)試狀態(tài)
5.4.1.1?沉降菌測(cè)試前,被測(cè)試潔凈室（區(qū)）的溫濕度必須達(dá)到規(guī)定的要求，靜壓差、換氣次數(shù)、空氣流速必須控制在規(guī)定值內(nèi)。
5.4.1.2?沉降菌測(cè)試前被測(cè)試潔凈室（區(qū)）已經(jīng)過(guò)消毒。
5.4.1.3?測(cè)試狀態(tài)有靜態(tài)和動(dòng)態(tài)二種，測(cè)試狀態(tài)的選擇必須符合生產(chǎn)的要求，并在報(bào)告中注明測(cè)試狀態(tài)。
靜態(tài)測(cè)試時(shí)潔凈室凈化空調(diào)系統(tǒng)已處于正常運(yùn)行狀態(tài)。
動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí)潔凈室已處于正常生產(chǎn)狀態(tài)。
5.4.2?測(cè)試人員
5.4.2.1?測(cè)試人員必須穿戴符合環(huán)境潔凈度級(jí)別的工作服.
5.4.2.2?靜態(tài)測(cè)試時(shí)，所有生產(chǎn)設(shè)備均已安裝就緒，但未運(yùn)行，室內(nèi)測(cè)試人員不得多于二人。
測(cè)試時(shí)間：對(duì)單向流，如100級(jí)凈化房間及層流工作臺(tái)，測(cè)應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于10分鐘后開始；對(duì)非單向流，如10000級(jí)、100000級(jí)以上的凈化房間，測(cè)試應(yīng)在凈化空調(diào)系統(tǒng)正常運(yùn)行不少于30分鐘后開始。
5.4.2.3?動(dòng)態(tài)測(cè)試時(shí)，所有生產(chǎn)設(shè)備按預(yù)定的工藝模式運(yùn)行并有規(guī)定數(shù)量的操作人員在現(xiàn)場(chǎng)操作。
5.4.3?測(cè)試步驟
5.4.3.1?采樣方法:將已制備好的培養(yǎng)皿按采樣點(diǎn)的布置要求放置，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)皿表面暴露0.5小時(shí) ，再將培養(yǎng)皿蓋蓋上后倒置。
5.4.3.2?培養(yǎng)：全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中，在30～35℃培養(yǎng)，時(shí)間不少于48小時(shí)。
5.4.3.3?菌落計(jì)數(shù)：用肉眼直接計(jì)數(shù)、標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)記，然后用5～10倍放大鏡檢查，有無(wú)遺漏。若培養(yǎng)皿上有二個(gè)以上菌落重疊，可分辨時(shí)以二個(gè)以上菌落數(shù)計(jì)數(shù)。
5.5?注意事項(xiàng)：
5.5.1?測(cè)試用具要做無(wú)菌處理，以確保測(cè)試的可靠性，正確性。
5.5.2?采取一切措施，防止人為對(duì)樣本的污染。
5.5.3?對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其它參數(shù)做祥細(xì)的記錄。
5.5.4?計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光對(duì)培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏記培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，并須注意細(xì)菌菌落與培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別。必要時(shí)，用顯微鏡鑒別。
5.5.5?采樣前應(yīng)仔細(xì)檢驗(yàn)每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量,如發(fā)現(xiàn)變質(zhì)、破損或污染的應(yīng)剔除。
5.6?結(jié)果計(jì)算：
用計(jì)數(shù)方法得出各個(gè)培養(yǎng)皿的菌落數(shù)，按下式計(jì)算：
M1+M2+………+Mn
平均菌落M=————————
n
式中：M–平均菌落數(shù)
M1–1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)
M2–2號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)
Mn–n號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù)
n–培養(yǎng)皿總數(shù)
5.7?結(jié)果評(píng)定：用平均菌落數(shù)判斷潔凈室（區(qū)）空氣中微生物。
5.7.1?潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)必須低于所選定的評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)。
5.7.2?若某潔凈室（區(qū)）內(nèi)的平均菌落數(shù)超過(guò)評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)，則必須對(duì)此區(qū)域先進(jìn)行消毒，然后重新采樣兩次，測(cè)試結(jié)果均須合格。
5.8?記錄：
5.8.1?測(cè)試報(bào)告中應(yīng)記錄房間溫度、相對(duì)濕度、壓差及測(cè)試狀態(tài)。記錄必須有日期和實(shí)驗(yàn)員簽名，并交質(zhì)量管理科會(huì)簽。
5.8.2?記錄本應(yīng)保留至最后一次記錄后的二年。
5.8.3?存檔處必須在記錄本中注明。
