ISO14698-1?生物潔凈室及其相關(guān)控制環(huán)境
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目錄?
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第一部分：臨時標(biāo)題：生物污染控制——總則??? ?????P1
附件A（標(biāo)準(zhǔn)）生物污染測量方法的原則???????????????????? P11
附錄B（參考）氣懸浮生物污染測量方法指導(dǎo)???????????????? P12
附件C（參考）空氣采樣器效率的評估與鑒定指導(dǎo)???????????? P15
附件D（參考）表面生物污染的測量方法指導(dǎo)???????????????? P19
附件E（參考）織品生物污染的測量方法指導(dǎo)????? ???????????P20
附件F（參考）洗衣驗證方法指導(dǎo)?????????????????????????? P22
附件G（參考）液體生物污染的測量方法指導(dǎo)???????????????? P25
附件H（參考）培訓(xùn)指導(dǎo)?????????????????????????????????? P26
第二部分：臨時標(biāo)題：生物污染控制——生物污染數(shù)據(jù)的評價與說明????? P32
第三部分；臨時標(biāo)題：生物污染控制——載有生物污染濕污物或生物膜的惰性表面的清潔與（或）消毒效率的測量方法??????????????????????????????P41
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前言
ISO（國際標(biāo)準(zhǔn)化組織）是國家標(biāo)準(zhǔn)機(jī)關(guān)（ISO成員機(jī)關(guān)）的全球性聯(lián)合會。世界標(biāo)準(zhǔn)的編寫工作通常由ISO技術(shù)委員會來完成。每個成員機(jī)關(guān)如果對專設(shè)技術(shù)委員會的某個主題感興趣，就有權(quán)向該委員會派出代表。凡與ISO有聯(lián)系的政府和非政府的國際組織也可參加這項工作。有關(guān)電工標(biāo)準(zhǔn)化的各項事宜，ISO正與國際電工委員會進(jìn)行密切合作。
被技術(shù)委員會采用的國際標(biāo)準(zhǔn)草本要發(fā)到成員機(jī)關(guān)進(jìn)行投票，是否作為國際標(biāo)準(zhǔn)出版要有75%以上的成員機(jī)關(guān)投票同意。
國際標(biāo)準(zhǔn)14698-1由潔凈室及其相關(guān)控制環(huán)境技術(shù)委員會ISO/TIC 209編寫。
ISO14698的大標(biāo)題為：潔凈室及其相關(guān)控制環(huán)境，其構(gòu)成有以上內(nèi)容：
第一部分：臨時標(biāo)題：生物污染控制——總則
第二部分：臨時標(biāo)題：生物污染控制——生物污染數(shù)據(jù)的評價與說明
第三部分；臨時標(biāo)題：生物污染控制——載有生物污染濕污物或生物膜的惰性表面的清潔與（或）消毒效率的測量方法
用戶應(yīng)當(dāng)注意，第一至第三部分的標(biāo)題是第一部分發(fā)放時的工作標(biāo)題，如果從工作計劃中刪去一個以上這樣的標(biāo)題，剩余部分可重新編號。
附件A是標(biāo)準(zhǔn)性文件，是國際標(biāo)準(zhǔn)的組成部分。附件B到G為參考性文件，提供較為詳細(xì)的信息。
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序言
本文描述的原理用于推行適宜的衛(wèi)生做法。只要有規(guī)定要求，可使用標(biāo)準(zhǔn)所附附件中建議的方法，但是建議的方法要與具體規(guī)定的方法相當(dāng)。
１ 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)描述了潔凈技術(shù)使用時評估與控制生物污染的正式系統(tǒng)的原則和基本方法，使危險區(qū)內(nèi)的生物污染得以被反復(fù)監(jiān)控以及選擇適當(dāng)?shù)目刂品椒?。在危險性小或可忽略不計的區(qū)域，本標(biāo)準(zhǔn)可作為參考。
２ 參考標(biāo)準(zhǔn)
以下標(biāo)準(zhǔn)含有通過本文文字的參比形成本標(biāo)準(zhǔn)條款的內(nèi)容。出版的時候，當(dāng)時提到的各版本是有效的。所有標(biāo)準(zhǔn)都會有修改，希望以本國際標(biāo)準(zhǔn)為準(zhǔn)的締約方了解是否可以采用以下最新版本的標(biāo)準(zhǔn)。IEC和ISO成員要對當(dāng)前有效的國際標(biāo)準(zhǔn)做好記錄。
ISO8402：質(zhì)量管理與質(zhì)量保證-詞匯
3?????????定義
為進(jìn)一步明確本標(biāo)準(zhǔn)的術(shù)語在潔凈室及其相關(guān)控制環(huán)境系列文件中的標(biāo)準(zhǔn)定義增加了額外的說明文字（如：微生物的，生物污染，有生命的）。以下定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)：
3．1
3．1．1
行動限量（action level）
規(guī)定了用戶根據(jù)控制環(huán)境廟宇的微生物限量。
注：當(dāng)超過行動限量時，需立即采取行動并了解后續(xù)的糾正措施。
3．1．2
空氣生物污染（aerobiocontamination）
空氣和/或氣體受到活粒子的污染。
3．1．3
報警限量（alert level）
規(guī)定了用戶為控制環(huán)境廟宇的微生物限量，發(fā)出可能偏離正常條件的早期警告。
注：超過報警限量時，應(yīng)進(jìn)行調(diào)查以確保過程和/或環(huán)境得到控制。
3．1．4
生物氣溶膠（bioaerosol）
在氣體環(huán)境中彌散的生物介質(zhì)（如：活粒子，過敏素，毒素或微生物原）
3．1．5
生物污染（biocontamination）
材料、器件、個體、表面、液體、氣體或空氣受活粒子的污染。
3．1．6
潔凈室（cleanroom）
空氣懸浮粒子濃度數(shù)量要受到控制的房間，其建造和使用方式是為了減少粒子帶入房間和在房間內(nèi)產(chǎn)生和滯留，并且必要時其它相關(guān)參數(shù)（如：溫度，濕度和壓力）要得到控制。
3．1．7
接觸裝置（contact device）
專用容器，用于裝放滅菌后的培養(yǎng)基，帶有可維護(hù)表面。
3．1．8
接觸盤（control plate）
接觸裝置，其容器是一個硬盤。
3．1．9
控制點（control point）
控制環(huán)境內(nèi)實施控制的任意點，在該點上可防止、消除生物污染危險或?qū)⑽ｋU減至合格的標(biāo)準(zhǔn)。
3．1．10
控制環(huán)境（controlled environment）
采用指定手段對污染源實施控制的規(guī)定區(qū)域。
3．1．11
改正措施（corrective action）
生物污染監(jiān)控結(jié)果表明已超出報警或行動限量時要采取的措施。
3．1．12
危害（hazard）
對個人、環(huán)境、工藝或產(chǎn)品產(chǎn)生不利影響的生物、化學(xué)或物理成分或因素。
3．1．13
碰撞（impact）
活粒子與固體表面的碰撞。
3．1．14
沖擊（impingement）
見液體分離。
3．1．15
液體分離：沖擊（liquid trapping: impingement）
活粒子與液面碰撞，液體隨后進(jìn)入。
3．1．16
鑒定（qualification）
展示實體是否能滿足指定要求（實體：活動、或工藝、產(chǎn)品、組織或其組合）的過程（ISO 8402）
3．1．17
危險（risk）
有關(guān)危害的已知有害結(jié)果發(fā)生的可能性。
3．1．18
沉降盤（settle plate）
指敞開一段時間的合適的容器（如：裝載適量滅菌培養(yǎng)基的、大小適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)皿）。
3．1．19
拭子（swab）
經(jīng)過滅菌的采集裝置，對正在采樣的微生物的生長無毒性、無抑制性，由適當(dāng)尺寸的特定材料構(gòu)成，裝在固定裝置上。
3．1．20
涂拭（swabbing）
用拭子對指定表面涂拭進(jìn)行采樣，拭子要用適當(dāng)?shù)妮腿∫海ㄏ疵撘海╊A(yù)先浸濕，以探測活粒子。
3．1．21
目標(biāo)限量（target level）
由用戶自定的指定微生物限量。
3．1．22
驗證（validation）
檢查和提供客觀證明，表明特定用途的特殊要求得到滿足，以此實現(xiàn)確認(rèn)（ISO 8402）
3．1．23
確認(rèn)（verification）
定期檢查正式系統(tǒng)是否按要求工作。
注：可采用監(jiān)測和審查方法、規(guī)程與試驗的方式，包括隨機(jī)采樣與分析，以確定正式系統(tǒng)是否正確地工作。
3．1．24
活粒子（viable particle）
能夠繁殖產(chǎn)生可觀察到生長的、孤立的、自然發(fā)生的或累積的微生物。
3．1．25
活單位（viable unit）（VU）
一個以上集結(jié)的活粒子可算為一個單位。當(dāng)瓊脂培養(yǎng)基生成一些被稱為菌落的VU時，通常將它們稱為菌落形成單位。
3．1．26
危險區(qū)（zone at risk）
個人、產(chǎn)品或材料（或以上內(nèi)容的任意組合）極易受微生物污染的地理定義與界定的空間。
3．2??使用狀態(tài)
3．2．1
空態(tài)（as-built）
此狀態(tài)為安裝已達(dá)到完成了各動力管線的連接并能發(fā)揮作用、但無生產(chǎn)設(shè)備、材料或人員。
3．2．2
靜態(tài)（at-rest）
此狀態(tài)為設(shè)備已安裝并能按用戶與供應(yīng)商之間達(dá)成的協(xié)議運(yùn)行，但無人員進(jìn)入。
3．2．3
動態(tài)（operational）
此狀態(tài)為安裝已按指定方式發(fā)揮作用，指定數(shù)量的人員已經(jīng)進(jìn)入并以約定的方式工作。
4??生物污染的控制原則
建立、使用和維護(hù)正式系統(tǒng)，以便在潔凈室和相關(guān)控制環(huán)境下評估和控制潔凈室和相關(guān)控制環(huán)境下的各因素，并影響工藝和產(chǎn)品的微生物質(zhì)量。
實現(xiàn)這一目標(biāo)有一些公認(rèn)的辦法，比如危險評估[1：2]，如危害分析臨界控制點（HACCP）系統(tǒng)[3：4]，故障樹分析（FTA）[5]，或故障方式與效果分析（FMEA）[6]。也可使用其它經(jīng)確認(rèn)的同等系統(tǒng)[7]。
注：根據(jù)HACCP原則修改的系統(tǒng)舉例以作參考[8]。
在這樣的系統(tǒng)內(nèi)部，可對具體危害及其控制的預(yù)防措施進(jìn)行分析、確定和文件編制。本標(biāo)準(zhǔn)只論述了微生物的危害。
為了評估和控制微生物的危害，選定的系統(tǒng)至少要涉及以下原則：
a)??發(fā)現(xiàn)與工藝、產(chǎn)品或個人相關(guān)的可能危害。評估發(fā)生危害的可能性，找到對其控制的預(yù)防措施。
b)??指定危險區(qū)，在每個區(qū)內(nèi)，確定可被控制的點/過程/操作步驟/環(huán)境條件，以消除危害或減少其發(fā)生的可能性。
c)??規(guī)定不允許超出的限量，以保證控制。
d)??規(guī)定有計劃進(jìn)行試驗或觀察，以監(jiān)視控制系統(tǒng)。
e)??規(guī)定當(dāng)監(jiān)控表明在某個點/過程/操作步驟/環(huán)境條件失控時要采取的改正措施。
f)??建立確認(rèn)系統(tǒng)正常工作的規(guī)程。
g)??建立并保存適當(dāng)?shù)奈募?/p>
5一般要求
用戶有責(zé)任開發(fā)、啟用、實施生物污染控制的監(jiān)控系統(tǒng)并對其進(jìn)行文件編寫，以便及時發(fā)現(xiàn)不利條件。這樣的計劃必須符合應(yīng)用現(xiàn)場、具體設(shè)施和指定條件，該系統(tǒng)必須是質(zhì)量管理系統(tǒng)的組成部分。這要包括對選定的正式系統(tǒng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)（有關(guān)生物污染的具體建議，請看附件H）。
此外，生物污染控制計劃的設(shè)計與實施要做到減少采樣本身造成產(chǎn)品和/或危險區(qū)污染的可能性。
危險區(qū)的分類應(yīng)按相關(guān)的原則或規(guī)定實施。按生物污染程度進(jìn)行的危險區(qū)分類可按以下情況評估：
–??低等危險或可忽略危險；
–??中等危險；
–??高危險；
–??最高危險。
本標(biāo)準(zhǔn)不意味也不接受空氣懸浮細(xì)菌和粒子污染等級之間的直接恒定或因果聯(lián)系。如果兩個參數(shù)的目標(biāo)等級是指定或強(qiáng)制的，可能需要單獨(dú)控制。
5．1??生物污染的分析與測量
生物污染可構(gòu)成危害的方面有表面、空氣、液體、織物等（見附件B，D，E，F(xiàn)）。
危險區(qū)如果采用了潔凈技術(shù)，其探測與監(jiān)控要按采樣計劃采用適當(dāng)方法通過采樣和計數(shù)活單位來實施。
當(dāng)設(shè)施為空態(tài)、靜態(tài)或隨時可用狀態(tài)時，要進(jìn)行危險區(qū)的監(jiān)控。在動態(tài)時也要按選定的正式系統(tǒng)進(jìn)行常規(guī)監(jiān)控。（見4）
5．2??采樣
以下為采樣的一般原則，詳情見附件A。
5．2．1??采樣計劃
采樣計劃通過選定的正式系統(tǒng)編寫，并作為文件式的程序格式化。這對于準(zhǔn)確評估和解釋生物污染數(shù)據(jù)是必要的。
區(qū)域處于動態(tài)時要進(jìn)行采樣，采樣時間在系統(tǒng)的壓力最大時（即：一班就要結(jié)束或活動量最大時）。
在靜態(tài)或隨時可用狀態(tài)時采樣也可有關(guān)于設(shè)施言教性能方面的有用信息。
采樣計劃應(yīng)包括以下內(nèi)容：
a)??為在選定的正式系統(tǒng)的框架內(nèi)提供參考的初期采樣計劃
b)??由于實施選定的正式系統(tǒng)產(chǎn)生的常規(guī)采樣計劃
5．2．2??采樣計劃的設(shè)計
為了保護(hù)個人、環(huán)境、工藝和產(chǎn)品，采樣計劃要考慮危險區(qū)的潔凈度和正在進(jìn)行活動要求的生物污染控制程度?，F(xiàn)就要考慮的內(nèi)容舉例：
a)??現(xiàn)場選擇，功能和地理方面；
b)??采樣數(shù)量；
注：有限或很少的采樣量可能不足以提供有代表性數(shù)據(jù)，但有時增加采樣次數(shù)可以彌補(bǔ)不足。
c)??采樣次數(shù)；
d)??采樣方法，包括試樣是質(zhì)量上的還是數(shù)量上的；
e)??采樣量/面積；
f)??稀釋劑，沖洗液，中和劑等；
g)??與影響培養(yǎng)結(jié)果特殊情況有關(guān)的因素；
h)??危險區(qū)內(nèi)操作、人員和設(shè)備的影響，它們構(gòu)成的生物污染如：
1）??壓縮氣體；
2）??房間空氣；
3）??制造設(shè)備；
4）??監(jiān)控測量裝置；
5）??存儲容器；
6）??區(qū)內(nèi)人員數(shù)；
7）??人員的未保護(hù)表面；
8）??個人打扮；
9）??防護(hù)服
10）墻壁/吊頂
11）地面
12）門
13）工作臺
14）椅子
15）從其它來源進(jìn)入的空氣
5．2．3??采樣次數(shù)
采樣次數(shù)應(yīng)通過選定的正式系統(tǒng)（見4）制定，并且必要時遇到以下情況要經(jīng)過確認(rèn)和/或修改：
a)??結(jié)果超過報警限量或行動限量
b)??延長了活動的停頓時間
c)??在危險區(qū)發(fā)現(xiàn)了感染劑
d)??在工作期內(nèi)對通風(fēng)系統(tǒng)進(jìn)行重大維護(hù)
e)??工藝變化影響到環(huán)境
f)??記錄到非常規(guī)結(jié)果
g)??清洗或消毒程序有變化
h)??非計劃事件引起生物污染
5．2．4??采樣點
采樣點的確定要通過選定的正式系統(tǒng)，并要反映在采樣計劃內(nèi)。
注：每個點的可能采樣在一次以上，在不同位置采樣次數(shù)可能不同。
在書面規(guī)程確定的點進(jìn)行采樣。
5．2．5??采樣區(qū)分
每個采樣的標(biāo)簽要有以下信息或可進(jìn)行信息追溯的編碼：
a)??采集點
b)??采集日期與時間
c)??采樣人員
d)??采樣時進(jìn)行的活動
e)??采樣區(qū)分及（如果合適）培養(yǎng)基類型
f)??與采樣計劃不同之處
5．2．6????????????方法
要選擇和采用適當(dāng)?shù)牟蓸臃椒ê陀嘘P(guān)孝順，以反映情況的復(fù)雜性和變化。采樣選用的設(shè)備和方法要符合書面規(guī)程和設(shè)備廠家提供的要求。
5．3??采樣的處理
樣品的采集、運(yùn)輸和處理不應(yīng)影響被采集細(xì)菌的活性和數(shù)量。要考慮的因素：
a)??運(yùn)輸/存放條件和時間
b)??中和劑的使用
c)??滲透溶質(zhì)的使用
5．4??樣品的培養(yǎng)
要根據(jù)預(yù)期的微生物種類及采樣的環(huán)境以及視使用的規(guī)程和設(shè)備情況選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基和/或培養(yǎng)條件（如：溫度、時間長度、氧張力，相對濕度）。
5．4．1??培養(yǎng)基
細(xì)菌和真菌的培養(yǎng)基應(yīng)為標(biāo)準(zhǔn)型，如無另外要求，則為非選擇型。培養(yǎng)基要有適當(dāng)?shù)奶砑觿员惝?dāng)采樣點有殘留的抗菌活動時（如：清洗/消毒程序后或它們在上述控制環(huán)境下經(jīng)過處理所帶的抗菌素）可以克服或減少影響。
如果在潔凈室或相關(guān)環(huán)境中使用培養(yǎng)基，培養(yǎng)基容器的外表面應(yīng)保有與其用途相適應(yīng)的潔凈度。
注：根據(jù)使用現(xiàn)場的情況，可能需要雙層或三層外包。
要保證對使用的培養(yǎng)基采用適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量控制規(guī)程。
5．4．2??培養(yǎng)
根據(jù)采樣的環(huán)境條件、培養(yǎng)基特性和微生物方法的確認(rèn)情況，應(yīng)為預(yù)期的微生物選擇接種培養(yǎng)基的適當(dāng)培養(yǎng)溫度和時間。
注1：如果涉及到厭氧、耐熱、微氧性、營養(yǎng)缺乏或需要復(fù)雜營養(yǎng)的細(xì)菌和真菌，可能需要特定的大氣條件和/或延長培養(yǎng)時間。一般公認(rèn)的培養(yǎng)總時間是，細(xì)菌5天，真菌7天，特別是在VU數(shù)很低時。從第一天開始就應(yīng)觀察培養(yǎng)皿。
注2：經(jīng)過適當(dāng)培養(yǎng)條件下的初步培養(yǎng)，對于中溫細(xì)菌，并根據(jù)采樣環(huán)境，在室溫和日光條件下延長3天的培養(yǎng)期可能是明智的。已經(jīng)得到證明，這樣做可以使曾經(jīng)暴露于空氣和表面的受力細(xì)菌復(fù)活，以獲得再次形成菌落的條件。
5．5??評價
生物污染的評價應(yīng)有有效改正措施的足夠信息。有關(guān)生物污染數(shù)據(jù)評價的詳細(xì)資料見ISO 14698-2。
注：評價整體生物污染是對危險區(qū)的重要控制功能?？捎帽O(jiān)控間接指標(biāo)來監(jiān)控微生物污染。但是，應(yīng)當(dāng)注意到，這樣的指標(biāo)與生物污染之間可能沒有直接的關(guān)系，因此，仍然要靠驗證和確認(rèn)來對生物污染進(jìn)行直接的預(yù)測。
5．5．1??計數(shù)
控制環(huán)境的細(xì)菌監(jiān)控可包括空氣、流體、表面、織物和設(shè)備細(xì)菌污染的鑒定，以便在短時間內(nèi)及時獲得到細(xì)菌狀態(tài)的代表性預(yù)測。一般認(rèn)可的做法是，與對其它微生物試樣相同，對生物污染的預(yù)測可受到實施該試驗使用的儀表與規(guī)程的影響。因此從采樣中計數(shù)活粒子只能在經(jīng)過適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)后以經(jīng)過確認(rèn)的適當(dāng)方法實施。
計數(shù)活粒子的信息見相應(yīng)的文件[13：14]
5．5．2??特征化
細(xì)菌監(jiān)控不可能對控制環(huán)境[7]中全部細(xì)菌污染進(jìn)行鑒別和量化。對生物污染數(shù)據(jù)的評價包括對采樣獲得的策生物進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶卣骰Ｌ卣骰某绦蛉Q于采樣區(qū)的臨界性或者調(diào)查是否能保證深入鑒別。將微生物分成幾大類（如按照菌落或細(xì)胞組織，污斑形成特性或其它特點分類）就足夠了。實施時，對相關(guān)微生物的鑒別可采用規(guī)定的微生物的實驗室方法至少做到屬類鑒別。鑒別臨界區(qū)的撮物要優(yōu)先于對非臨界區(qū)的微生物鑒別。
注：鑒別控制環(huán)境分離出的活粒子可能有助于特定危險區(qū)事先想到的普通菌群，以及清洗消毒程序、方法和制劑的效果。由鑒別程序收信的信息還可用于調(diào)查污染源，尤其是超過行動限量或在做決策時。
6??目標(biāo)、報警和行動限量
建議對危險區(qū)環(huán)境中通常存在的菌群要有數(shù)、質(zhì)量上的了解，以便對個人、工藝、產(chǎn)品或設(shè)備的污染危險做出判斷，及進(jìn)行有意義的難和采取改正措施。
目標(biāo)、報警和行動限量應(yīng)由潔凈室和/或控制環(huán)境的用戶獨(dú)立制定。應(yīng)根據(jù)危險區(qū)的等級劃分和使用現(xiàn)場具體的要求，指定適當(dāng)?shù)纳镂廴鞠蘖?。該限量采用控制環(huán)境的當(dāng)前技術(shù)應(yīng)很容易得到。
注：在控制環(huán)境的起動初期，及根據(jù)正式系統(tǒng)確定的間隔期間內(nèi)，應(yīng)審議關(guān)于生物污染水平的數(shù)據(jù)，以制定和/或確定報警與行動限量的基線。該限量應(yīng)與目標(biāo)限量有關(guān)，但也應(yīng)對它們進(jìn)行審議并做出適當(dāng)調(diào)整。
7??效果的表達(dá)與解釋
生物污染的數(shù)量預(yù)測完成后，液體的每份采樣（或計數(shù)單位）的活實體（單位）數(shù)用活體單位（VU）來表達(dá)，或者如果采用菌落計數(shù)、以菌落形成單位（CFU）來評估，則推廣到SI測量單位（如ｍ3，dｍ2，m，等）。數(shù)據(jù)評價的有關(guān)資料見ISO 14698-2。
由于細(xì)菌環(huán)境監(jiān)控方法存在公認(rèn)的限制，對生物污染的審議要延長時間，以決定趨勢是否確定。隨后可根據(jù)以上趨勢評價和解釋控制環(huán)境的生物污染狀態(tài)。根據(jù)對以上調(diào)查和具體生物試驗結(jié)果的審議，對因要求產(chǎn)生的結(jié)果的重要性和操作或按該條件加工的產(chǎn)品的可接受性做出決定。
危險區(qū)的微生物分類要按總生物污染的目標(biāo)限量確定進(jìn)行，這包括了空氣、流體、表面、織物和設(shè)備的細(xì)菌含量。
8??驗證
根據(jù)4ｆ，要定期檢查監(jiān)控生物污染的結(jié)果，以確認(rèn)選定的系統(tǒng)按規(guī)程發(fā)揮作用，以及指定的要求得到了滿足。這樣做可能要增加試驗及對各項工作步驟和設(shè)備進(jìn)行系統(tǒng)的驗證，以保證系統(tǒng)具有良好的功能。
如果難表明偏離了規(guī)定限量，或者控制環(huán)境的微生物狀態(tài)起了變化，應(yīng)實施改正。必要時要修改系統(tǒng)。
9??鑒定、認(rèn)證和再認(rèn)證
對選定的系統(tǒng)進(jìn)行鑒定是認(rèn)證過程的一部分。
注：有關(guān)微生物認(rèn)證的方法資料見[15：16]
10??文件
文件應(yīng)包括或參閱以下內(nèi)容：
a）??采樣類型；
b）??使用的試驗方法，以及必要時提供標(biāo)準(zhǔn)的編號和標(biāo)題；
c）??使用的采集裝置；
d）??采樣點；
e）??采樣時進(jìn)行的活動類型，包括人員進(jìn)入狀態(tài)；
f）??視情況可提供采樣區(qū)內(nèi)人數(shù)；
g）??采樣日期及必要是時采樣時間；
h）??視情況提供采樣用時；
i）??采樣查驗日期；
j）??培養(yǎng)的條件和時長；
k）??與所說試驗方法不一致的地方和可能已影響到結(jié)果的因素；
l）??初次和末次讀出后采集標(biāo)本檢查的試驗結(jié)果；
m）??完成數(shù)量試驗后，VU數(shù)要推廣到相應(yīng)的SI測量單位；
n）??如果已特征化，要有提取物的說明；
o）??負(fù)責(zé)試驗報告的組織名稱和試驗完成日期；
p）??負(fù)責(zé)試驗的人員姓名和簽字。
附件A（標(biāo)準(zhǔn)）
生物污染測量方法的原則
A．1??序言
本附件列出了在需要生物污染控制的環(huán)境下表面生物污染分析、測量和評估須遵守的原則。為了探測存在和可能需要監(jiān)控的活粒子，附件涉及采集代表性采樣。
本標(biāo)準(zhǔn)描述了應(yīng)用潔凈技術(shù)的危險區(qū)生物污染評估與控制的一般原則與基本方法，對生物污染的評估應(yīng)與本標(biāo)準(zhǔn)一道進(jìn)行。
此外，還要考慮以下因素：
a）?采樣設(shè)備與方法；
b）?采樣效率；
c）?儲運(yùn)過程中采樣活粒子的存活；
d）?結(jié)果表達(dá)。
A．2??原則
危險區(qū)細(xì)菌污染的探測與監(jiān)控方法是按照采樣計劃用適當(dāng)?shù)牟蓸友b置采集活粒子。
A．3??選擇采樣裝置
由于生物污染的采集與預(yù)測有多種方法和相關(guān)裝置，因此采樣裝置的選擇應(yīng)根據(jù)監(jiān)控區(qū)的情況預(yù)先判別。選擇特定的用途應(yīng)考慮以下重要因素：
a）?要進(jìn)行采樣的活粒子類型（營養(yǎng)細(xì)胞和/或細(xì)菌及/或真菌孢子）；
b）?活粒子對采樣過程的敏感性；
c）?活粒子的預(yù)期濃度；
d）?原生菌群；
e）?混合種群；
f）?探測少量生物污染的能力；
g）?采樣危險區(qū)周圍環(huán)境條件；
h）?采樣時間與耗時；
i）?采樣方法，采樣培養(yǎng)基的材料和特性；
j）?采集精度與效率；
k）?培養(yǎng)及活粒子探測和評估方法；
l）?要得到的信息類型（如數(shù)量、質(zhì)量方面）。
A．4??采樣方法
由于要采樣的成分有多種類型，也有一些對它們進(jìn)行采樣的方法[2；4；5；8]，選定的方法要考慮由環(huán)境和要使用的監(jiān)控設(shè)備主導(dǎo)的限制。在對活粒子進(jìn)行采樣時，應(yīng)考慮以下重要因素：
a）?采集，粒子去除和/或捕集的效率；
b）?采集與儲運(yùn)過程中活粒子的存活；
c）?必要時要考慮萃取/沖洗液。
A．5??采樣
代表性樣品的采集所使用的方法和容器不應(yīng)增加和/或抑制固有的生物污染。（見5.3）
附錄B
（參考）
氣懸浮生物污染測量方法指導(dǎo)
B．1??序言
本附件提供了指導(dǎo)并描述了在需要生物污染控制的環(huán)境下空氣懸浮生物污染的分析與測量技術(shù)。為了探測存在和可能需要監(jiān)控的活粒子，附件涉及采集代表性采樣。
氣懸浮生物污染的評估遵循本標(biāo)準(zhǔn)和附件A的基本原則，它們要求在采用潔凈技術(shù)時要建立評估和控制生物污染的正式系統(tǒng)。
對危險區(qū)氣懸浮生物污染的評估原則和方法進(jìn)行了說明。
采樣裝置的鑒定技術(shù)見附件C（參考）。
B．2??原則
當(dāng)危險區(qū)為空態(tài)、靜態(tài)、適當(dāng)?shù)目梢允褂脩B(tài)和常規(guī)的正常使用時，危險區(qū)內(nèi)空氣的細(xì)菌污染探測和監(jiān)控方法是按采樣計劃用適當(dāng)?shù)牟蓸友b置采集活粒子。通過對采集培養(yǎng)基的直接震動或采用專用膜過濾器過濾（對以上膜進(jìn)行后續(xù)處理）采集粒子。
B．3??采樣裝置
空氣懸浮活粒子的采集和計數(shù)有各種方法和采樣裝置[17；24；28]；特殊方法、材料和裝置的選用取決于采樣的目的。氣溶膠采樣的效率會受到粒子動量的影響，（質(zhì)量與速率的產(chǎn)物）；因此在選擇適當(dāng)?shù)姆椒ê驮O(shè)備[17；18；21-28]時需格外注意。
采樣裝置分為兩類：
1）????????無源采樣裝置，如沉淀盤，（涂敷玻璃或金屬盤或滑動片和布；
2）????????有源采樣裝置，如震動和液體捕集采樣器和過濾采樣器。
以上裝置的生產(chǎn)廠家須提供使用說明書和使用限制。
B．3．1??選擇采樣裝置
采樣率，采樣時長和選定的采樣裝置可能會對采集的微生物的存活性產(chǎn)生很大的影響。沖擊裝置可能不適合對空氣懸浮活粒子的采樣，因為容量小，采樣率低并且容易打碎活粒子團(tuán)[21]。
由于投入商業(yè)使用的細(xì)菌空氣采樣系統(tǒng)數(shù)量大、種類多，所有系統(tǒng)又都有各自不同的物理和生物效率[19；32]，因此在選擇特定的用途時應(yīng)至少考慮以下因素：
a）???需采樣的活粒子的類型（細(xì)菌和/或真菌的孢子和/或營養(yǎng)細(xì)胞）[32]
b）???活粒子對采樣程序的敏感度
c）???期望的活粒子濃度
d）???探測生物污染量多少的能力
e）???用于所期望微生物的適當(dāng)培養(yǎng)基
f）???采樣時間與耗時
g）???采樣環(huán)境的周圍環(huán)境條件
h）???采樣器對單向氣流的干擾
i）???采樣器的特性，如：
1）????對于低含量空氣懸浮活粒子的適當(dāng)采吸流量
2）????適當(dāng)?shù)恼饎?氣流速度
3）????采樣精度與效率
4）????易于搬運(yùn)（重量，體積）和操作（使用方便，輔助設(shè)備，對真空泵的依賴，水、電等）
5）????易于清洗、消毒或滅菌
6）????對要測量的生物污染不會自然增加活粒子
來自采樣器的排氣不應(yīng)污染潔凈室。
B．3．2??無源細(xì)菌采樣裝置（沉淀式采樣裝置）
無源細(xì)菌空氣采樣器（重力沉淀采樣器）如沉淀盤，不測量空氣中活粒子的總數(shù)，只測量活粒子污染表面的速度。因此沉淀盤可用于對產(chǎn)品的氣懸浮污染進(jìn)行數(shù)、質(zhì)量的評估。先按單位時間確定沉淀盤的計數(shù)，然后將產(chǎn)品暴露的面積和時間與沉淀盤的相聯(lián)系，即可算出產(chǎn)品可能受到的污染量[28-30]。
以上裝置沒有總氣懸浮粒子的數(shù)量監(jiān)控值，因為它們無法探測不沉淀到培養(yǎng)基表面的微生物，而且活粒子群的沉淀速度會受到氣流及其擾動的影響。沉淀盤只應(yīng)從數(shù)量、質(zhì)量方面評估[21]因重力沉淀于特定使用場內(nèi)的空氣懸浮粒子對產(chǎn)品/裝置/表面的可能污染情況[28；29；30]（見附件D）。
B．3．3??有源細(xì)菌采樣器
為評估空氣的細(xì)菌質(zhì)量，需要在危險區(qū)使用有源空氣采樣裝置。有幾種商用的有源裝置，每種都有自己的限制。為了測量特殊情況如通風(fēng)管和單向氣流中的空氣生物污染，應(yīng)在等動力狀態(tài)下進(jìn)行采樣。如果采樣不是等動力的，得到的就可能是無代表性的、數(shù)量偏大的大粒子。如果吸管與氣流方向形成角度，也會引起活粒子的失真分布。進(jìn)入測量裝置的抽氣速率應(yīng)與周圍空氣移動的速率相同且與氣流方向一致。
大多數(shù)的采樣器都有固定的真空入口方向，可以是垂直的（面朝下），也可以是水平的。有的采樣器有可移動的入口。入口速率通常是固定的；但是，在不同裝置之間入口速率會有很大區(qū)別，這一點在選擇設(shè)備時應(yīng)加以考慮。
采樣時，采樣點的空氣移動方向可采用煙玻管來記錄。
有的采樣器不適于等動力采樣，選擇時應(yīng)考慮監(jiān)控要求。根據(jù)采樣原理，有兩種主要采樣方法和相應(yīng)的設(shè)備適用于生物污染正常的的危險區(qū)（低含量），即震動采樣器和過濾采樣器。
B．3．3．1??震動和液體捕集采樣器
由于有多種震動和液體捕集或沖擊采樣器可用于探測活粒子的高低濃度[19；30]，選用的裝置應(yīng)有以下特點：
a）??撞擊培養(yǎng)基的采樣空氣的震動速度是以下兩種情況之間的折衷，1）速率高，足以采集到約1μｍ的活粒子，2），速率低，足以避免因機(jī)械損傷或打碎細(xì)菌或微小真菌團(tuán)引起的活粒子存活性的下降；
b）??抽氣流量，它決定著采樣時間，是兩方面因素的折衷，即需要足夠的采樣量以探測含量很低的生物污染和避免大量采樣會使采集培養(yǎng)基的物理與生物特性發(fā)生重大改變；
c）??在生物污染較重區(qū)，請適當(dāng)選用震動方法和采樣量，以得到能夠解讀結(jié)果數(shù)據(jù)的單獨(dú)的菌群[20]。
采樣裝置至少要符合以下要求：
a）?在適當(dāng)時間內(nèi)采集1ｍ3、而又不會使采樣培養(yǎng)基明顯干燥的足夠流量，如約100L/min；
b）?對培養(yǎng)基的中等震動程度，如<20m/s。
B．3．3．2??過濾采樣器
過濾采樣裝置廣泛用于氣溶膠采樣。通過適當(dāng)選擇送氣機(jī)、過濾器介質(zhì)和過濾器尺寸，在給定的采樣時間內(nèi)幾乎可做任意量的采樣。
由于采用脫水方法，過濾可能會降低某些種類微生物的存活性，因此，選擇適當(dāng)?shù)牟蓸悠髟O(shè)計十分重要。過濾器通過若干原理從大氣中或氣流中去除粒子。這些原理有直接攔截，慣性處理，擴(kuò)散沉積，靜電吸附和重力吸引。在給定情況下起決定作用的原理取決于流量、過濾器性質(zhì)和氣溶膠性質(zhì)。
對于過濾采樣裝置的設(shè)計和使用，請考慮以下重要因素：
a）??沒有影響活粒子震動過濾膜速度的靜電；
b）??保證適用的限制或抽氣流量及震動空氣速度與B．3．3．1相同；
c）??保證過濾膜架與真空源連接，帶有測量采吸率的裝置，不污染過濾器材料；
d）??保證過濾膜架可在無菌狀態(tài)下放置于過濾器架上，并可在過濾掉所需量的空氣后以無菌的方式取下，可直接放到培養(yǎng)基上或者如果是膠質(zhì)過濾膜，則按以下要求實施辦法：
1）????建議方法：將濾膜溶于培養(yǎng)皿內(nèi)2.5ml的無菌氯化鈉緩沖液中（0.9%v/v）。適當(dāng)搖動培養(yǎng)皿后將其置于培養(yǎng)箱內(nèi)，以適當(dāng)溫度培養(yǎng)1到20分鐘以促進(jìn)溶解。使用該溶液的一份等分試樣接種到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上以適當(dāng)溫度培養(yǎng)。
2）????替代方法：將濾膜直接放到適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上以適當(dāng)溫度培養(yǎng)。
進(jìn)行生物氣溶膠[20]采樣時，請考慮環(huán)境條件和過濾器要求的限制，如：
a）??溫度；
b）??含水量；
c）??人工制品配方；
d）??過濾器尺寸；
e）??過濾器機(jī)械特性；
f）??從采樣點到實驗室的輸送條件；
g）??只針對活粒子的計數(shù)限制。
B．4??結(jié)果的表述
建議活粒子數(shù)的表達(dá)采用活單位（VU），推廣到1m3。
附件C（參考）
空氣采樣器效率的評估與鑒定指導(dǎo)
C．1引言
本附件提供的指導(dǎo)和技術(shù)說明涉及對空氣生物污染測量所用空氣采樣器的評估與鑒定．通常，這項工作由空氣采樣器的廠家或第三方試驗機(jī)構(gòu)完成．
細(xì)菌空氣采樣器的總效率是兩方面不同因素的產(chǎn)物：
a)??物理效率；
b)??生物效率：
震動采樣器的物理效率取決于粒子的特點，包括粒徑、形狀和密度：生物效率取決于若干因素，如：
a)??采集到的活粒子的類型；
b)??活粒子的生長特點：
c)??活粒子的代謝活動；
d)??預(yù)空氣處理：
c)??大氣條件(包括溫濕度)
f)??氣溶膠的種類和存在時間：
g)??捕集機(jī)制和采樣時間[25]
因此在使用細(xì)菌采樣器了解以上兩點效率因素并擁有它們的特點數(shù)據(jù)是十分重要的，這可使采樣器按用途得到鑒定，及根據(jù)采樣得到的污染結(jié)果與潛力有關(guān)。
C．2鑒定的原則
為了對裝置做出鑒定，要對生物氣溶膠的物理與生物效率進(jìn)行特征化，要考慮的問題有：
a)在適當(dāng)房間內(nèi)可能遇到粒子范圍采集氣溶膠粒子的物理效率；
b)革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性茵和孢子的生物效率。如果需要對危防區(qū)真菌污染探測采樣器進(jìn)行鑒定，應(yīng)包括對酵母生物氣溶膠樣品的采集：
一在環(huán)境控制區(qū)內(nèi)；
一有標(biāo)準(zhǔn)生物氣溶膠：
—采用產(chǎn)生和保持生物氣溶膠空氣懸浮狀態(tài)的標(biāo)準(zhǔn)方法；按指定的環(huán)境參數(shù)[21]。
注：有些空氣懸浮微生物，尤其是無性繁殖的代謝式活性菌在采集過程中常常失去活性。
C．3采樣器與試驗條件
C．3．1試驗區(qū)
試驗區(qū)應(yīng)帶高效過濾器出風(fēng)口和排風(fēng)，并應(yīng)以負(fù)壓運(yùn)行。
溫度應(yīng)保持在(22+2)℃，相對濕度應(yīng)在(50+10)％。試驗區(qū)的儀器在操作時不得有人員進(jìn)入該區(qū)。．
C．3．2生物氣溶膠
為便于測量，試驗用氣溶膠應(yīng)為非病原性的，應(yīng)有良好的生存和存儲特性，即遺傳上是穩(wěn)定的。
氣溶膠采用適當(dāng)?shù)脑囼灳囊后w懸浮液制作．試驗菌生長的培養(yǎng)基可滿足本細(xì)菌的營養(yǎng)要求。
C．3．2．2??測試物理效率的試驗菌株
使用的試驗菌株應(yīng)為枯草桿菌黑色變種NCTC 10073（=DSM 2277），制備成清洗孢子懸浮液。洗出的孢子應(yīng)置于帶有不同濃度懸浮固體的80%的乙醇中以106到107ml/之間的濃度進(jìn)行離心和懸浮，以便在氣溶膠化時產(chǎn)生多種粒徑。所需固體濃度的計算可按以下說明：按論文[26]和[27]描述的基本技術(shù)。
C．3．2．3??生物效率
生物效率試驗應(yīng)采用活孢子（109VU/ml）和無性繁殖細(xì)胞的混合物（50：50）。
C．3．2．3．1??試驗菌株，革蘭氏陽性
建議將嗜酸乳桿菌ATCC 4556（=DSM 20079；=NCIB 8690）作為適宜的試驗菌株，代表革蘭氏陽性菌。
該有機(jī)物應(yīng)以（36+1）℃在Elliker流體培養(yǎng)基或經(jīng)確認(rèn)的同等培養(yǎng)基中培養(yǎng)（18+2）小時。
建議將Elliker瓊脂或經(jīng)確認(rèn)的同等培養(yǎng)基作為適宜的固體采集培養(yǎng)基，并應(yīng)在（36+1）℃培養(yǎng)。
C．3．2．3．2??試驗菌株，革蘭氏陰性
建議將大腸桿菌ATCC 10536（=DSM 682；=NCIB 8879）作為適宜的試驗菌株，代表革蘭氏陰性菌。
該有機(jī)物應(yīng)以（36+1）℃培養(yǎng)，應(yīng)將5ml該培養(yǎng)物接種至45ml的新鮮胰化胨大豆流體培養(yǎng)基或經(jīng)確認(rèn)的同等培養(yǎng)基上，培養(yǎng)4h。然后該流體培養(yǎng)基用作噴灑液以50：50的比例與每ml枯草桿菌黑色變種懸浮液中109的孢子進(jìn)行混合。
使用的固體采集培養(yǎng)基應(yīng)為酪蛋白胨大豆粉胨瓊脂或經(jīng)確認(rèn)的同等培養(yǎng)基，以（36+1）℃培養(yǎng)。
C．3．2．3．3??酵母試驗菌株
注：必要時，建議將發(fā)面酵母ATCC 9804（=DSM 70478；=NCYC 91；=CBS 4000）一種潔凈室中不一定能找到的酵母作為適宜的試驗菌株，代表真菌。
該有機(jī)物應(yīng)以（30+1）℃在麥芽浸膏流體培養(yǎng)基或確認(rèn)的同等培養(yǎng)上培養(yǎng)（18+2）h。然后該流體培養(yǎng)基用作噴灑液以50：50的比例與每ml枯草桿菌黑色變種懸浮液中109的孢子進(jìn)行混合。
使用的采集培養(yǎng)基應(yīng)為麥芽浸膏瓊脂或經(jīng)確認(rèn)的同等培養(yǎng)基，以（30+1）℃培養(yǎng)。
C．3．3??鑒定
C．3．3．1??物理效率試驗
基本技術(shù)在[26]和[27]中有說明。
所有氣溶膠化器應(yīng)能產(chǎn)生諸如由陀螺氣溶膠發(fā)生器（STAG）產(chǎn)生的控制粒徑氣溶膠。產(chǎn)生的初始粒徑見等式：
附件D（參考）
表面生物污染的測量方法指導(dǎo)
D．1??引言
本附件提供了指導(dǎo)并描述了在需要生物污染控制的環(huán)境下表面生物污染的分析與測量技術(shù)。為了探測存在和可能需要監(jiān)控的活粒子，附件涉及采集代表性采樣。
對危險區(qū)表面污染的評價原則和方法進(jìn)行了說明。
表面生物污染的評價遵循本標(biāo)準(zhǔn)和附件A的基本原則，它們要求在采用潔凈技術(shù)時要建立評價和控制生物污染的正式系統(tǒng)。
D．2??原則
當(dāng)危險區(qū)為空態(tài)、靜態(tài)、適當(dāng)?shù)目梢允褂脩B(tài)和在常規(guī)的正常使用時，危險區(qū)內(nèi)空氣的細(xì)菌污染探測和監(jiān)控方法是按采樣計劃用適當(dāng)?shù)牟蓸友b置采集活粒子。通過對采集培養(yǎng)基的直接震動或采用專用膜過濾器過濾（對以上膜進(jìn)行后續(xù)處理）采集粒子。
D．3??采樣裝置
D．3．1??接觸式采樣裝置
接觸式采樣裝置可用于平滑表面。
可用接觸盤或其它裝在適當(dāng)軟式或硬式容器中的培養(yǎng)基與采樣表面接觸的其它裝置。使用的表面接觸裝置應(yīng)有不小于20cm2的接觸表面。
使用接觸盤的水平采樣點的理想方法如下：培養(yǎng)基表面應(yīng)與采樣點接觸不少于10s，向整個接觸表面施加恒定均勻的壓力（如施加的質(zhì)量約為25g/cm2），不得有環(huán)形或線性運(yùn)動。裝置有接觸并拿開后，要加蓋并盡快用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件培養(yǎng)。
D．3．2??間接采樣裝置
采樣活體單位也可采用適當(dāng)?shù)拿掴F技術(shù)[10-12]。采用經(jīng)過滅菌的潮濕錦釬、海綿或擦布特別適用于大面積、非吸引式、不規(guī)則或接觸裝置無法使用的凹面的采樣。
也可使用沉淀盤對懸浮活粒子因重力沉淀于特定使用區(qū)形成的表面污染進(jìn)行數(shù)質(zhì)量評估。(參考潔凈室http://m.gxshunjiang.com/)
D．3．2．1??棉釬
應(yīng)使用棉釬（最好是合成物[4，5]）先用經(jīng)過消毒的沖洗介質(zhì)，如緩沖生理鹽水、林格氏溶液或適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基沾濕。在指定采樣區(qū)用潮濕棉釬密排平行擦拭，同時緩慢轉(zhuǎn)動棉釬。應(yīng)對相同區(qū)重復(fù)進(jìn)行采樣，用同一棉釬垂直于開始的涂抹進(jìn)行涂擦。采樣后，棉釬應(yīng)置于規(guī)定量的適當(dāng)?shù)南緵_洗液中攪動。應(yīng)對該沖洗液做活單位試驗（[10]提供了適當(dāng)?shù)脑囼灧椒ǎ?/p>
D．3．2．2??沉淀盤
必要時，可先用裝有適當(dāng)培養(yǎng)基的沉淀盤確定在給定時間內(nèi)通過重力作用從空氣沉淀到表面的帶菌粒子數(shù)；然后該盤送去培養(yǎng)。此法不測量空氣中含有的細(xì)菌總數(shù)，只測量在采樣期間沉淀在表面的細(xì)菌數(shù)。使用大口徑的培養(yǎng)皿（即14cm直徑）并延長接觸時間可提高此方法的靈敏度，但要防止培養(yǎng)基脫水（[16]提供了適當(dāng)?shù)姆椒ǎ?/p>
D．4??結(jié)果的表述
建議表面活粒子數(shù)的表達(dá)采用活單位（VU），推廣到1dm2，或者如果使用沉淀盤，則推廣到1dm2/h(1dm2=100cm2)。
附件E（參考）
織品生物污染的測量方法指導(dǎo)
E．1??引言
本附件提供了指導(dǎo)并描述了在需要生物污染控制的環(huán)境下織品生物污染可能選用的分析與測量技術(shù)。
對危險區(qū)織品污染的評價原則和方法進(jìn)行了說明。
織品生物污染的評價遵循本標(biāo)準(zhǔn)和附件A的基本原則，它們要求在采用潔凈技術(shù)時要建立評價和控制織品生物污染的正式系統(tǒng)。
為了探測和監(jiān)控織品上或從織品脫落的活粒子，本評價涉及采集代表性采樣。在危險區(qū)使用的織品應(yīng)有足夠的潔凈度以適于其使用的活動和用途。應(yīng)當(dāng)對織品的生物污染進(jìn)行監(jiān)控以減少對危險區(qū)內(nèi)活動、產(chǎn)品、裝置等構(gòu)成不利影響的危險。
關(guān)于織品的選擇，以了解危險區(qū)內(nèi)相關(guān)生物污染的情況，以及對該生物污染的評價，應(yīng)考慮以下重要因素：
a)????????織品的種類與形式，如保護(hù)衣，擦布等；
b)???????織物選擇；
c)????????織物的粒子產(chǎn)生與擴(kuò)散特點；
d)???????因織物特性形成的阻隔作用不足；
e)????????織品的清洗處理；
f)????????從織品上清除粒子的效率；
g)???????織品的設(shè)計；
h)???????織品的可滲透率和表面條件。
如果發(fā)現(xiàn)織品的生物污染超量，要采用適當(dāng)?shù)姆椒ú檎铱赡艿脑?。一般原因可能有?/p>
a)??因織物特性如纖維類型、編織或設(shè)計引起的粒子不良滯留；
b)??使用不當(dāng)，如衣服更換不勤；
c)??除污染不充分和/或清洗效果不好；
d)??危險區(qū)微生物限制的織品清洗周期不適當(dāng)。
本附件提供的指導(dǎo)不用于確定活粒子對織物的滲透率，為此需用其它技術(shù)[34]。此外，本附件不涉及某些用途可能需要的特定方面的織品，如經(jīng)滅菌和去粒子的織物，也不涉及由目檢或觸摸判別的織品質(zhì)量。
E．2??原則
危險區(qū)織品細(xì)菌污染通過使用適當(dāng)?shù)牟蓸友b置按采樣計劃采集活粒子實施探測和監(jiān)控。采集活粒子可用直接接觸或間接采集法，如使用膜過濾技術(shù)。
E．3??采樣裝置
本章說明的多種采樣方法在用來除粒子時可能會有很大的不同。
E．3．1??接觸式采樣裝置
為確定織品上的活粒子，可使用適當(dāng)?shù)慕佑|式裝置（見附件D），包括可用于小織品的裝置。
如果使用的采樣裝置在支托上用了脫水培養(yǎng)基，可按廠家指定的液量或使用使洗滌劑和/或消毒劑滅活或中和的溶液進(jìn)行再水化。
E．3．2??膜過濾采樣裝置
織品表面的活粒子采樣可用帶有適當(dāng)膜過濾器的膜過濾架進(jìn)行[35；36]，此處，織物放在有膜過濾器的膜過濾架開口處，空氣經(jīng)采吸經(jīng)過織物。然后檢查膜過濾器的活粒子。
E．4??結(jié)果的表述
建議表面活粒子數(shù)的表達(dá)采用活單位（VU），推廣到1dm2的采樣織品(1dm2=100cm2)。
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附件F（參考）
洗衣驗證方法指導(dǎo)
F．1??引言
本附件提供了指導(dǎo)并描述了在需要生物污染控制的環(huán)境下洗衣過程的驗證技術(shù)。
F．2??測試方法
F．2．1原則
驗證需要使用若干片與送洗織物同種的材料．以上織物片要經(jīng)過已測量數(shù)量的己知微生物的污染，然后送去經(jīng)歷要被驗證的洗滌過程。要檢查該過程能否去除105的細(xì)菌數(shù)和104的酵母和真菌孢子數(shù)。
要進(jìn)行以下控制：
a)??控制A：計數(shù)初期微生物懸浮液的話單位?？刂艫為了表明微生物的量初數(shù)量達(dá)到一定的高度，以測量是否將微生物降至所需的數(shù)量；
b)??控制B：計數(shù)控制織物片的活單位數(shù)，該織物片除了洗衣過程外．要經(jīng)歷過與試驗片完全相同的過程?？刂艬是為了表明微生物的存活性在驗證期間不發(fā)生變化；
c）??控制c；計數(shù)控制織物片的活單位數(shù)，該織物片要經(jīng)歷過與試驗片完全相同的過程，包括洗衣過程．但只是在洗衣后受到了微生物懸浮液的污染?？刂艭是為了表明計數(shù)微生物數(shù)的技術(shù)適用于該工藝條件(時間，機(jī)械作用，溫度，織物上有無清洗產(chǎn)品殘留物等)。
試驗中已知微生物的懸浮液足以蛋白溶液制備的．試驗片涂上己知量的懸浮液，與普通織物一起送洗．洗完后計數(shù)試驗片上的微生物數(shù)．測量微生物的減少量并與(F．2．1)中提到的值進(jìn)行比較．
注：在評估認(rèn)可對試驗洗衣過程的驗證前，該過程的產(chǎn)品不得用于潔凈室．
F．2．2微生物
F．2．2．1細(xì)菌
至少應(yīng)使用以下細(xì)菌菌株：
a)腸球菌hirae ATCCl0541
b)大腸桿菌ATCCl0536
F.2. 2. 2真菌
如果要?dú)⒄婢?，至少要使用以下真菌菌株?/p>
白色念珠菌ATCC2091
黑曲霉ATCCl6404
F．22 3細(xì)菌孢子
如果要?dú)珂咦?，至少要使用以下菌株孢子?/p>
枯草桿菌黑色變種ATCC9372
F．2．3細(xì)菌懸浮液
F．2．3．1懸浮液介質(zhì)
應(yīng)使用滅菌胨鹽水作為細(xì)菌懸浮液的介質(zhì)。對于真曲，加005％(容積比)多乙氧基醚。細(xì)菌孢子應(yīng)使用滅菌蒸餾水。
F．2．?2。?3??回收介質(zhì)
可使用懸浮液介質(zhì)、蒸餾水或可在試驗條件下被過濾的任何溶液。如果必須用殺菌中和劑，可將其加在回收介質(zhì)中．
F．2．3．3蛋白溶液
要制備以下溶液：
一溶液A: 3％(W／V)牛清蛋白(Cobh氏餾份v)，需要時調(diào)到pH=6．8，采用膜過濾消毒；
一溶液B：15％(W／V)的酵母提取物，調(diào)到pH=7，以121℃蒸煮20分鐘：
一溶液C：A和B兩種溶液按100：20的比例混合，使每種蛋白的濃度為2．5％(w/V)。
F．2．4控制與測試織物片
織物片采用脫漿的織物制成，該織物片須代表洗滌過程要驗證的送洗織物．它們只應(yīng)使用一次?？椢锲恼麄€尺寸為l0cm×5cm，包括5x5cm的污染區(qū)和用于將其固定于送洗織物的多余邊。
織物片用蒸汽可穿透的材料包裹，以121℃蒸煮20mm。
F．2．5培養(yǎng)液的制備
制備每ml含I09的細(xì)菌細(xì)胞或108的真菌細(xì)胞或細(xì)菌孢子懸浮液．
F．2．6程序
F．2．6．1控制
控制A；培養(yǎng)懸浮液經(jīng)適當(dāng)稀釋后計數(shù)瓊脂培養(yǎng)基中的雙份VU，含育30-300VU／ml的稀釋液中兩個計數(shù)的平均值為N。檢查原始懸浮液的數(shù)字是否為細(xì)菌細(xì)胞為≥109／ml真菌細(xì)胞或細(xì)菌孢子為108／ml．
控制B：使用適當(dāng)?shù)南♂屢?，用含?0-300VU／ml的0.5ml的懸浮液培養(yǎng)兩個控制片，用含有300-3000VU／ml的0.5ml的懸浮液培養(yǎng)另外兩個控制片．這四個控制片在整個試驗過程中，除了不參與洗衣過程，其它時候均與試驗片一起處理和試驗．回到實驗室后，它們要放到培養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)．計數(shù)VU．與污染最嚴(yán)重的控制片對應(yīng)的平均計數(shù)為N’1，另一個為N’2?
控制C：在一個控制片上涂0,5ml的蛋白溶劑C。進(jìn)行全過程洗衣．然后浸沒在l00ml回收介質(zhì)中撞動15-30秒，放到培養(yǎng)皿上沉淀。接著在該控制片上涂含有30-300VU／ml的lml的懸浮液，將其用10ml的瓊脂培養(yǎng)基覆蓋、培養(yǎng)后計數(shù)．該計數(shù)為n1。用能夠阻擋微生物的濾膜過濾先前使用的100ml回收介質(zhì)．沖洗三遍，在過濾膜上覆蓋50ml的新回收介質(zhì)．在50ml的回收介質(zhì)中加Iml的含30-300VU／ml的懸浮液，然后過濾。膜與過濾器再用另外5ml的回收介質(zhì)沖洗，然后過濾。
將膜放到瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)．該計數(shù)為n2計算
n=(n1+n2)/2。
如果N≈N’2≈n，就只為試驗本身驗證實驗條件．
如果N’2≤0.5N和或N’1≤0．05N和／或n≤0．5N，就不只為試驗本身驗證實驗條件．重新進(jìn)行控制，如添加適當(dāng)?shù)幕衔镆灾泻退拖纯刂破幕瘜W(xué)殘留物．
F．2．6．2測試
將3ml微生物懸浮液(F.2.5)和2ml(F.2.3 3)中的蛋白溶液C混合并在環(huán)境溫度下保持接觸5min．將產(chǎn)生的0.5ml的懸浮液涂到試驗片上。為測試每個受試的微生物，要使三個試驗片接受污染．
送洗后，要盡快將控制片送回到實驗室．每一片要放入100ml的回收介質(zhì)內(nèi)，攪拌15至30s．
然后：
a)0.1ml放入9.9ml回收介質(zhì)后攪拌。然后該混合物放到濾膜上．用50ml新回收介質(zhì)沖洗三次．將膜放到瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)；
b)將lml放到濾膜上，用50ml新回收介質(zhì)沖洗三次，將膜放到瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)：
c)剩余的98.9ml放到站膜上，用50ml新回收介質(zhì)沖洗三次，將膜放到瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)：
d)每個試驗片以無菌方式放到一個培養(yǎng)皿上,用瓊脂培養(yǎng)基覆蓋并培養(yǎng)。
n’1為各膜上確定的VU數(shù)，是F.2.6.2中a)，b)，c)產(chǎn)生的計數(shù)平均值。
n’2是F.2.6.2中d)試驗片確定的VU平均數(shù)．
因此是送洗后殘留微生物的數(shù)字．
F．2.7結(jié)果的解釋
計算涂到控制片上微生物數(shù)N與R的比率檢查送洗是否可保證減少細(xì)茵數(shù)的105因數(shù)和減少酵母菌及真菌孢子數(shù)104。
附件G（參考）
液體生物污染的測量方法指導(dǎo)
G．1??引言
本附件提供了指導(dǎo)并描述了在需要生物污染控制的環(huán)境下液體（水的或非水的）生物污染的評價技術(shù)。為了探測存在和可能需要監(jiān)控的活粒子，附件涉及采集代表性采樣。
液體生物污染的評價遵循本標(biāo)準(zhǔn)和附件A的一般原則，它們要求在采用潔凈技術(shù)時要建立評價和控制液體生物污染的正式系統(tǒng)。此外，應(yīng)考慮以下因素[37-43]：
a)????????危險區(qū)內(nèi)細(xì)菌生態(tài)及相關(guān)參數(shù)；
b)???????特定液體中活粒子的希望濃度；
c)????????液體條件；
d)???????采集的精確性與效率。
G．2??原則
當(dāng)危險區(qū)處于準(zhǔn)備就緒、可以使用狀態(tài)時，應(yīng)按正常使用情況下適當(dāng)和例行的做法通過用適當(dāng)?shù)牟蓸友b置按采樣計劃對危險區(qū)中液體的細(xì)菌污染進(jìn)行探測和監(jiān)控?？刹捎弥苯踊蜷g接技術(shù)實施活粒子的數(shù)量質(zhì)量探測。
G．3??過程
確定液體生物污染有各種方法，選擇哪種方法取決于液體的性質(zhì)和需要采樣的量，比如可以使用灌澆平碟，展寬平碟，膜過濾和其它方法。
采樣時液體壓力要適當(dāng)降低，應(yīng)注意液體條件和液體中活單位的期望濃度。
G．3．1??采樣準(zhǔn)備
根據(jù)液體和生物污染的程度，試樣的測試可直接或在適當(dāng)處理后進(jìn)行。
G．3．2??采樣
選擇的生物污染探測方法應(yīng)與要采樣液體的性質(zhì)相適應(yīng)，可能需要以下技術(shù)：
a）??直接培養(yǎng)，如展寬平碟，系列稀釋（MPN方法）；
b）??間接培養(yǎng)，如采用膜過濾方法的采樣濃度，該法有后續(xù)培養(yǎng)或帶放射標(biāo)簽基質(zhì)及放射活性測量；
c）??細(xì)菌ATP測量；
d）??阻抗測量。
G．4??結(jié)果表述
建議表面活粒子數(shù)的表述采用活單位（VU），推廣到1ml(或1cm3)。
附件H（參考）
培訓(xùn)指導(dǎo)
H．1??引言
本附件提供指導(dǎo)并描述潔凈室生物污染控制和相關(guān)控制環(huán)境下人員培訓(xùn)的適當(dāng)技術(shù)。
對質(zhì)量管理各項內(nèi)容的基本貢獻(xiàn)和關(guān)鍵是對按本標(biāo)準(zhǔn)使用選用系統(tǒng)人員進(jìn)行連續(xù)、有組織和適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)。各有關(guān)人員須經(jīng)過適當(dāng)培訓(xùn)，以保證一致、可靠和可重復(fù)的結(jié)果和服務(wù)提供。要對參與微生物監(jiān)控和實驗室分析的人員，包括分包商的人員，給與適當(dāng)?shù)呐嘤?xùn)。
培訓(xùn)要求編寫可用的規(guī)程和配有文件的培訓(xùn)材料，記錄使用的性能成分及培訓(xùn)驗證系統(tǒng)[44]。培訓(xùn)可在機(jī)構(gòu)內(nèi)實施或由獨(dú)立機(jī)構(gòu)在外部實施。
本附件不提供能力評價、表現(xiàn)水平、表現(xiàn)評價或完整人員培訓(xùn)的標(biāo)準(zhǔn)，而用于指出生物污染控制領(lǐng)域或培訓(xùn)和驗證周期中包括的最重要活動和內(nèi)容。
H．2??標(biāo)準(zhǔn)化培訓(xùn)的內(nèi)容
凡規(guī)程保證之處都要編寫培訓(xùn)文件，該文件要詳細(xì)說明單個步驟或程序。第一步應(yīng)進(jìn)行細(xì)分以充分描述以上步驟所需的培訓(xùn)范圍和內(nèi)容。
H．2．1??培訓(xùn)文件
培訓(xùn)文件應(yīng)考慮以下方面：
a）??培訓(xùn)中要用的文件和參考項列表；
b）??要使用的培訓(xùn)目標(biāo)及方法的說明與定義；
c）??每個程序步驟的詳細(xì)說明，以充分理解實施該步驟的要求；
d）??必要時的測量結(jié)果；
e）??計劃的培訓(xùn)課程，是否在內(nèi)部還是設(shè)施外；
f）??性能標(biāo)準(zhǔn)評價的說明。
應(yīng)為選定的系統(tǒng)編寫統(tǒng)一的培訓(xùn)手冊，而非為每個程序或試驗編制單獨(dú)的指南。應(yīng)采用統(tǒng)一文件格式，重點在有關(guān)程序上，避免過多綜合性的背景介紹。
H．2．2??培訓(xùn)手冊
部門或組織就將有關(guān)某個區(qū)域或設(shè)施的各培訓(xùn)文件分成單個手冊，以作為培訓(xùn)手冊。這一手冊應(yīng)將程序的細(xì)節(jié)轉(zhuǎn)成單獨(dú)的、可清楚理解的步驟，并使之標(biāo)準(zhǔn)化，以達(dá)到合格的性能。
培訓(xùn)手冊一般應(yīng)用于以下目的：
a）??培訓(xùn)新雇員；
b）??采用新方法、儀表和采樣裝置；
c）??良好的微生物/衛(wèi)生作法和實驗室安全；
d）??風(fēng)險分析；
e）??采樣/監(jiān)控計劃的改變；
f）??表現(xiàn)欠佳時的再度培訓(xùn)；
g）??定期驗證。
H．2．3??微生物控制及微生物污染控制程序
對于控制環(huán)境內(nèi)所有人員、負(fù)責(zé)管理和環(huán)境控制計劃一般操作的人個，包括采樣人員和實驗室技術(shù)員，正式的培訓(xùn)計劃應(yīng)有：
a）??微生物學(xué)的基本原理；
b）??應(yīng)用微生物學(xué)、衛(wèi)生和流行病學(xué)的基本原理；
c）??良好的雇員消毒技術(shù)和預(yù)防措施；
d）??環(huán)境控制過程原理；
e）??微生物采樣技術(shù)；
f）??微生物危害分析的基本原理；
g）??理解生物污染的目標(biāo)、報警和行動限量；
h）??趨勢分析原理；
i）??各項要求實驗方法和用于幫助細(xì)菌識別的專門化培訓(xùn)；
j）??清楚的報告編寫。
H．3??培訓(xùn)確認(rèn)
確認(rèn)應(yīng)向用戶保證培訓(xùn)已進(jìn)行并制作了文件。對人員已進(jìn)行了指定系統(tǒng)培訓(xùn)的確認(rèn)應(yīng)根據(jù)規(guī)程進(jìn)行。因此培訓(xùn)確認(rèn)應(yīng)強(qiáng)調(diào)規(guī)程實施的細(xì)節(jié)。為了便于確認(rèn)雇員在與其工作相關(guān)規(guī)程方面的表現(xiàn)，建議以系統(tǒng)的方式實施培訓(xùn)確認(rèn)。
H．3．1??評估手段
培訓(xùn)確認(rèn)規(guī)程寫好后，需設(shè)計評價手段以確認(rèn)培訓(xùn)的有效性。對雇員表現(xiàn)的評價要對照由實驗室/部門管理人員/監(jiān)督或培訓(xùn)機(jī)構(gòu)制定的表現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)?？捎糜诖_認(rèn)表現(xiàn)的各種“測量手段”有：
a）??對照培訓(xùn)學(xué)習(xí)目的的評價；
b）??筆試；
c）??評價反應(yīng)能力；
1）??相關(guān)領(lǐng)域的案例研究；
2）??問題；
3）??與規(guī)程有關(guān)的情形。
d）??對有關(guān)堆積口頭詢問的反應(yīng)；
e）??測試。
1）????盲試樣；
2）????熟練測試樣；
3）????以前分析試樣。
在進(jìn)行評估前，各參加人須得到成就可接受水平的預(yù)定及驗證標(biāo)準(zhǔn)。此外，評價與確認(rèn)手段就公布并交各參加人審議。
H．3．2??文件
培訓(xùn)結(jié)果文件可能得到不同系統(tǒng)的支持。雇員記錄的制作與格式上的一致性對于培訓(xùn)確認(rèn)是很重要的。
確認(rèn)文件應(yīng)符合法規(guī)和認(rèn)可要求與標(biāo)準(zhǔn)，及組織（雇員）和/或部門政策，每個實驗室/部門服務(wù)與指導(dǎo)原則。
H．3．2．1??記錄保留
記錄還應(yīng)以清楚的書面形式保留，記有以下內(nèi)容：
a）??受訓(xùn)人身份；
b）??培訓(xùn)負(fù)責(zé)人；
c）??記錄存放處及掌管人；
d）??記錄可以銷毀的時間；
e）??審定記錄的時間與方法。
<span “=””>
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前言
ISO為全球各國標(biāo)準(zhǔn)化團(tuán)體（ISO會員團(tuán)體）的聯(lián)合會。其國際標(biāo)準(zhǔn)工作的開展一般是由ISO各技術(shù)委員會進(jìn)行，每個會員團(tuán)體，如對技術(shù)委員會的某一課題感興趣，均有權(quán)成為該技術(shù)委員會的代表。任何與ISO保持聯(lián)系的國際組織，無論是政府的，還是非政府的，都可以參加此項工作。ISO與國際電氣技術(shù)委員會（IES）在電氣技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化的各領(lǐng)域進(jìn)行緊密合作。
國際標(biāo)準(zhǔn)草案經(jīng)技術(shù)委員會認(rèn)可后，送各會員團(tuán)體傳閱，以待表決。草案作為國際標(biāo)準(zhǔn)頒布至少需要75%的會員罷休對其投贊成票。
國際標(biāo)準(zhǔn)ISO 14698-3由ISO/TC209技術(shù)委員會（潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境）提出。
ISO14698在潔凈室及其相關(guān)受控環(huán)境的總標(biāo)題下，由以下各部分組成：
—-第1部分：暫定標(biāo)題：生物污染控制—總則
—-第2部分：暫定標(biāo)題：生物污染控制—生物污染數(shù)據(jù)的評定和說明
—-第3部分：暫定標(biāo)題：生物污染控制—對載有生物污染的濕性培養(yǎng)基或生物膜之惰性表面進(jìn)行清洗和/或消毒過程的效率測量方法
用戶注意，第1到第3部分的標(biāo)題是出版第1部分時采用的工作標(biāo)題。如果其中一項或多項標(biāo)準(zhǔn)被從工作計劃中刪除，則需對其余的標(biāo)題重新加以編號。
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1?范圍
本ISO標(biāo)準(zhǔn)給出的基本指導(dǎo)原則和方法要求適用?廠對各種微生物數(shù)據(jù)進(jìn)行評定
所選系統(tǒng)規(guī)定的危險區(qū)內(nèi)對有生命粒子采樣得到的生物污染數(shù)據(jù)進(jìn)行估計。
ISO 14698的本部分應(yīng)與適宜的其它ISO 14698系列標(biāo)準(zhǔn)及其附件一起使用。
本標(biāo)準(zhǔn)不適用于測試確定有生命單位的微生物計數(shù)技術(shù)的性能：如應(yīng)該定期使用的板式汁數(shù)法適用的標(biāo)準(zhǔn)是ISOE 30[3l。
2??參考標(biāo)準(zhǔn)
下述參考標(biāo)準(zhǔn)包含在本文中引用的構(gòu)成ISO標(biāo)準(zhǔn)的條款。指明的版本在出版時均是有效的。所有版本均可進(jìn)行修改。鼓勵I(lǐng)SO的協(xié)議各方探討使用下述最新版本標(biāo)準(zhǔn)文件的可能性。
ISO和LEC的成員保存有當(dāng)前有效的國際標(biāo)準(zhǔn)。
ISO 8402：質(zhì)量管理和質(zhì)量保證——詞匯
ISOE 30：分析數(shù)據(jù)的統(tǒng)計：微生物實驗室的質(zhì)量控制
ISO 3534-I? (1993年12月)：統(tǒng)計——詞匯和符號——第1部分：概率和通用統(tǒng)計術(shù)語
ISO 3534-2? (1993年12月)：統(tǒng)計——詞匯和符號——第2部分：統(tǒng)計質(zhì)量控制
IS0 7218：? 1996??微生物——微生物檢驗通則
3??術(shù)語
為進(jìn)一步闡明本標(biāo)準(zhǔn)中使用的術(shù)語，在潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境系列文件的標(biāo)準(zhǔn)定義部分增加了補(bǔ)充說明性的詞匯(如，微生物、生物污染、有生命的)。下列定義適用于本國際標(biāo)準(zhǔn)：
3．1
行動限值(actionlevel(s))
由用戶按規(guī)定設(shè)定的、受控環(huán)境內(nèi)的微生物級別
注如超過了行動限值，要求立即研究糾正措施，并馬上采取行動。
3．2
空氣生物污染(aerobiocontaminatlon)
空氣中和／或氣體中由有生命粒子造成的污染
3．3
警報限值(sleftlevel(s))
由用戶按規(guī)定為受控環(huán)境設(shè)定的微生物限量。
注如超過了警戒級，應(yīng)調(diào)查研究，保證過程和／或環(huán)境處于控制之下
3．4
生物氣溶膠(bioaeros01)
在氣態(tài)環(huán)境中彌散的生物介質(zhì)(如有生命的粒子、過敏原、毒素或微生物原的生物性活性復(fù)合物)。
3．? 5
生物污染(biocontamination)
材料、器件、個體、表面、液體、氣體或空氣受有生命的粒子污染
3.6
潔凈室（CIeanroom)
室內(nèi)懸浮粒子濃度受控的房間。房間的建造和使用方式都要盡可能減少室內(nèi)引入、產(chǎn)生和滯留粒子，室內(nèi)其它相關(guān)的參數(shù)(如溫度、濕度和壓力)按要求控制
3．7
接觸裝置(contactdevice)
特殊設(shè)計的、用于裝放已滅菌的培養(yǎng)基，帶有可維護(hù)表面
3．8
接觸皿(contactplate)
容器是剛性碟子的接觸裝置
3．9
控制點(controlpoint)
受控環(huán)境中的任意降低到合格的限值在該點處采取微生物措施，防止生物污染的危害，并把其消除
3．10
糾正措施(correcfiveaction(s))
生物污染監(jiān)測結(jié)果表明超過了警報限值或行動限值時應(yīng)采取的措施
3．11
估計(estimation)
根據(jù)對樣品的觀察，把數(shù)值賦予選定作為采樣群體之統(tǒng)計模型的分布參數(shù)的工作過程(1SO3534-1：1993)
3．12
估計值(estimate)
經(jīng)過估計得出的估計值(1S03534-1
3．13
估計量(eatimator)
用于估計群體參數(shù)的統(tǒng)計量(1S03534-：
3．14
評定(evaluation)
對數(shù)據(jù)值進(jìn)行鑒別的工作過程
3．15
危害(hazard)
任何對個體、環(huán)境、工藝或產(chǎn)品造成有害影響的生物、化學(xué)、物理組份或因素
3．16
碰撞(impact)
有生命粒子對一固體表面的碰撞
3．17
沖擊(implngement)
見液體分離
3．18
液體分離：撞擊（iquid trapping；）
3. 19
鑒定(qualification)
證明一個實體是否能滿足規(guī)定的要求的過程（實體：活動或工藝、產(chǎn)品、組織或上述任何項的組合）（ISO 8402）
3. 20
危險(risd)
一種有害物已確定的危害性后果
3. 21
沉降皿(settle plate)
指定敞開一段規(guī)定時間的容器(如裝有已滅菌的培養(yǎng)基媒介的、規(guī)格適宜的培養(yǎng)皿)
3. 22
分層現(xiàn)象(stratification)
定群體分成在所研究的特性方面更具有同質(zhì)性的子群體或?qū)拥墓ぷ鬟^程
3. 23
拭子(swab)
經(jīng)過滅菌的收集裝置，對被采樣的微生物無毒性、無抑制作用，由大小適宜的特定材料構(gòu)成，裝在一固定裝置上
3．24
涂拭(swabbing)
用事先以萃取液(洗脫液)潤濕的拭子涂拭一規(guī)定面積的表面，以此方法取樣來檢測有生命的粒子
3. 25
目標(biāo)限值(target level(s))
由用戶為其自身目的按規(guī)定設(shè)定的微生物限值
3.26
認(rèn)證(validation)
通過準(zhǔn)備并檢驗客觀證據(jù)來確認(rèn)達(dá)到了對特定用途的特殊要求
3．27
活粒子(viable particle)
能夠繁殖、產(chǎn)生可表明的增長的、孤立的、自然生成的微生物或群集的微生物
3．28
活單位(viable unit(VUI)
一個或多個聚集在一起的活粒子，作為一個單位來計數(shù)。當(dāng)以在瓊脂培養(yǎng)基上的菌落來計算VUs時，通常把它們稱作菌落成型單位(CFU)
3.29
危險區(qū)(zone at risk)
按地理位置確定、并劃定界限的空間，在其中的個體、產(chǎn)品或材料(或上述任何項的組合)尤其易受生物污染
4???生物污染數(shù)據(jù)的評定和說明
對危險區(qū)進(jìn)行微生物監(jiān)測得出的生物污染數(shù)據(jù)在進(jìn)行估計和評定時，應(yīng)把下述因素考慮在內(nèi)：
a)??收集的數(shù)據(jù)的標(biāo)識；
b)??要求的定量資料量；
c)??方法(如，統(tǒng)計規(guī)程的選擇、相關(guān)性分析、人工智能等)
d)??數(shù)據(jù)分層(見4．2．4)：
e)??生物污染監(jiān)測數(shù)據(jù)的表示法；
f)??有生命的粒子的定量和定性的確定；
8)??分析方法的可靠性的潛在問題；
h)??時間趨勢(趨勢分析)：
i)??控制圖表(見4．2．4和4．2，6)：
考慮到下述兩種情況，建議生物污染數(shù)據(jù)的評定分兩個階段進(jìn)行：
a)??基本組分，包括初級監(jiān)測階段(見4．1)：
b)? (常規(guī))監(jiān)測時對生物污染數(shù)據(jù)的估計和評定(見4．2)。
4.1??生物污染數(shù)據(jù)的估計、說明和報告：
4．1初始監(jiān)測階段生物污染數(shù)據(jù)的估計和評定
4．1．1確定生物污染的存在和影響
確定生物污染的存在和影響要求利用直接和間接的微生物監(jiān)測方法分幾步完成。為保證可靠的估計生物污染數(shù)據(jù)，至少應(yīng)把下述重要因素考慮在內(nèi)：
a)??采樣：采樣材料要有適當(dāng)數(shù)量和同質(zhì)性，樣品稀釋液要有適當(dāng)精度(見IS014698-1)：
b)??活粒子各種組分、隨時間的可變性、(不斷增長的阻力)的影響，或?qū)π掖娴暮蛷?fù)原的活粒子的壓力和傷害作用；
c)??來自受控環(huán)境內(nèi)和/或危險區(qū)內(nèi)不同采樣點的生物污染數(shù)據(jù)(見IS014698-1)：
d)??培養(yǎng)技術(shù)和／或估計方法：
e)??分析方法(定量和／或質(zhì)定的估計)的選擇及直接和間接微生物檢驗之間關(guān)系的程度。
4．1．2生物污染數(shù)據(jù)的收集
為設(shè)定初始工作限值，通常在初始監(jiān)測階段對受控環(huán)境中活粒子進(jìn)行較頻繁的測定。隨著對生物污染的了解不斷深入，測定頻率也可以降低。
4．1．3??目標(biāo)、警報和行動限值
用戶應(yīng)該對每個危險區(qū)就其應(yīng)用領(lǐng)域的特殊要求和通過實施采樣計劃得到的初始數(shù)據(jù)結(jié)果確定適當(dāng)?shù)哪繕?biāo)限值，然后據(jù)此制定出適當(dāng)?shù)木瘓蠛托袆酉拗?。根?jù)得到的微生物監(jiān)測數(shù)據(jù)，可能需要適當(dāng)?shù)卣{(diào)整上述限值。
4．1．4?認(rèn)證
每種常規(guī)使用的計數(shù)技術(shù)都應(yīng)進(jìn)行認(rèn)證。對估計方法進(jìn)行認(rèn)證可以定量和定性地掌握主要的生物污染情況。
認(rèn)證計數(shù)方法應(yīng)該考慮下述情況：
a)??有關(guān)的活粒子：
b)??預(yù)期的活粒子數(shù)目(如濃縮或稀釋樣品的要求)：
c)??所選媒介支持生長的能力和保證復(fù)原的能力：
d)??所選培養(yǎng)基的條件能否支持在所選培養(yǎng)基媒介內(nèi)／上充分生長；
e)??所選孵化時間能否足以可靠地預(yù)計樣品中的生命計數(shù)：?
f)??能否利用代謝活動來估計活單位。
認(rèn)證微生物技術(shù)的指導(dǎo)說明見[13；14]。
4．1．5??糾正行動(變化控制)
采取的行動應(yīng)該包括：
a)??清除嚴(yán)重的和/或系統(tǒng)性的誤差
b)??評定發(fā)生的變化：
c)??制定修正的方法的恢復(fù)效率：
d)??認(rèn)證設(shè)備：
e)??證明及文件。
4. 1. 6??記錄
對方法、儀表、內(nèi)部審計的常規(guī)或定期的檢查、原始的觀察、計算、數(shù)據(jù)和最終的報告的記錄等都應(yīng)存檔保管。記錄必須包括參與采樣、制備、測試、評定和報告的人員的身份、簽字。草簽或標(biāo)記的記錄應(yīng)該保管好，并且適當(dāng)?shù)母隆?/p>
報告將按要求分發(fā)。其中可包括傳真、郵件和/或電子數(shù)據(jù)傳輸。
對數(shù)據(jù)/記錄包括計算機(jī)中的文件應(yīng)提供適當(dāng)?shù)谋Ｗo(hù)。
4．2??常規(guī)監(jiān)測階段生物污染數(shù)據(jù)的估計和評定
常規(guī)監(jiān)測內(nèi)容有采樣、樣品追蹤、數(shù)據(jù)收集、數(shù)據(jù)記錄、數(shù)據(jù)評定、微生物數(shù)據(jù)評定的統(tǒng)計表示和趨勢分析及控制圖表。
4．2．1??采樣和樣品追蹤
有效的生物污染數(shù)據(jù)最重要的步驟，即采樣的資料可見ISO 14698-1。此外，實驗室應(yīng)該有可靠適用的規(guī)程，對從接收到分析中的樣品進(jìn)行明確的標(biāo)識和處理，并且能保證結(jié)果和樣品相對應(yīng)，放置無誤。
4．?2．2??數(shù)據(jù)收集
采樣計劃應(yīng)該遵循ISO14698-1的通則。
為避免收信到有差錯的數(shù)據(jù),至少應(yīng)該考慮到下述情況:
a)??特殊的應(yīng)用;
b)??識別特定的數(shù)據(jù)參數(shù)；
c)??過程／系統(tǒng)中的數(shù)據(jù)收集點;
d)??檢測限制；
e)??測試系統(tǒng)的靈敏度；
f)??工作和工作數(shù)據(jù)的收集。
4．2．3數(shù)據(jù)記錄
為保證在規(guī)定的期間內(nèi)可隨時得到關(guān)于測試的各種資料,應(yīng)該編制并實施數(shù)據(jù)記錄和處理的明確規(guī)程，其中應(yīng)包括下述各項：
a)??原始數(shù)據(jù)：
b)??記錄中的資料類型和清單；
c)??實驗室文件或計算機(jī)化的記錄的標(biāo)記和放置地點：
d)??使用工作手冊、工作表格或計算機(jī)或其他手段記錄各種觀察結(jié)果、計算或其他有關(guān)資料：
e)??突出顯示樣品異常值的標(biāo)準(zhǔn)方法：
f)??對結(jié)果改善情況的審查跟蹤：
g)??如重復(fù)進(jìn)行分析，必須明確規(guī)定出合格的數(shù)值；
h)??必須遵循的關(guān)于記錄、檢查、糾正、簽署及會簽觀察結(jié)果、計算和報告的規(guī)程;
i)??關(guān)于持續(xù)說明的建議；
j)??特定的、法律的或規(guī)章的要求；
k)??適用于對目標(biāo)限值有作用的應(yīng)用領(lǐng)域的要求。
4．2．4．?dāng)?shù)據(jù)評定
在對生物數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計計算之前，特別是記錄有許多觀察結(jié)果時，需要對數(shù)據(jù)進(jìn)行編排壓縮，使主要特性明確顯示出來(數(shù)據(jù)分層)?？梢圆捎枚ㄐ苑椒ǎ虬褱y量結(jié)果分組，繪成頻率表和圖表，或用描述統(tǒng)計法實現(xiàn)。適合用統(tǒng)計法的數(shù)據(jù)可以是單個數(shù)據(jù)的測量結(jié)果，或是擁有特定屬性的成份數(shù)之計數(shù)。
在各次測量中：
a)??要有文件來闡述制定方法的手段和確認(rèn)方法的統(tǒng)計技術(shù)；
b)??方法應(yīng)該已經(jīng)在公認(rèn)的科學(xué)?？习l(fā)表過：
c)??應(yīng)對如何更換測量方法進(jìn)行說明。
4．2．5??微生物數(shù)據(jù)評定之統(tǒng)計表示法
可以采取有效的統(tǒng)計方法對所選系統(tǒng)進(jìn)行質(zhì)量控制。統(tǒng)計技術(shù)的核心是外推法，把樣品推廣到采樣危險區(qū)的微生物群體。由于樣品表示的污染群體可能不精確，所以外推法本身自有一定的危險。因此，如果正確地進(jìn)行監(jiān)測和評定，這種危險可以量化，并通過概率采樣和統(tǒng)計法把其降到可以接受的程度(如，[4]；[9—11]：ISO 3534-2：1993)。
注??建議采用多種統(tǒng)計方法來說明和評定統(tǒng)計數(shù)據(jù)。基于統(tǒng)計評定法和說明資料的復(fù)雜性，本標(biāo)準(zhǔn)未對監(jiān)測和鑒定用統(tǒng)計方法的選擇和使用進(jìn)行任何闡述。
4．2．6??趨勢分析和控制圖表表示
取自單一樣品的數(shù)據(jù)通常意義不大：另外，微生物監(jiān)測技術(shù)可能有嚴(yán)重的缺陷，會導(dǎo)致很高的微生物數(shù)據(jù)變化率。??因此，用圖表表示在一段給定時間內(nèi)收集的數(shù)據(jù)會有助于區(qū)分采樣變化與實際趨勢，或在估計值仍在規(guī)定的范圍之內(nèi)時能指示出發(fā)生的重大變化。
應(yīng)該用控制圖表法提供一客觀的、統(tǒng)計上有效的手段[9)來鑒定危險區(qū)的質(zhì)量。特別是適用于監(jiān)測的方法。在進(jìn)行鑒定時(標(biāo)準(zhǔn)IS014698—1中的原則4f)，可以用批次驗收采樣作為另外一種質(zhì)量控制技術(shù)[7)。如果是用“Shewhart’’控制圖表的方法(1SO 3534-2：1993)來繪制圖表，也可以用基于范圍(BOR)或基于累計總量圖(CSC)的控制圖表[7]來測量偏離估計值正常隨機(jī)分布的情況，并突出顯示出重大的不符合技術(shù)性能的結(jié)果[6-91。
4．3??生物污染數(shù)據(jù)的說明和估計
給定樣品中沒有微生物，不一定表明正在凋查的生物污染事件中沒有微生物污染?？赡茉诓蓸訒r危險區(qū)內(nèi)恰巧不存在活粒子。反言之，活粒子的存在可能具有積極的意義，即反應(yīng)出微生物是從一個非采樣區(qū)進(jìn)入了出“事故”的危險區(qū)。制定適當(dāng)受控的、定期檢驗的微生物監(jiān)測計劃可以降低不確定程度。另外，在估計規(guī)程中也應(yīng)反應(yīng)出下確定程度，
4. 4??認(rèn)證
為了確定監(jiān)測的效率和分析方法的效率,應(yīng)該定期以文件的形式對結(jié)果進(jìn)行認(rèn)證?？梢杂冒幢O(jiān)測數(shù)據(jù)來計算空氣、表面、織物和液體的平均活粒子計數(shù)（和適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)偏差）的方法來檢驗危險區(qū)的目標(biāo)限值、警報限值和行動限值。
4．5??不符合技術(shù)規(guī)定的結(jié)果
每次當(dāng)實驗室測試結(jié)果不符合技術(shù)規(guī)格的情況（事故）發(fā)生時，都要求進(jìn)行評定和/或認(rèn)證。評定的目的是決定是否能把不符合技術(shù)規(guī)定的結(jié)果認(rèn)定為真實結(jié)果。此處認(rèn)證的目的是確認(rèn)不符合技術(shù)規(guī)定的結(jié)果是否源于實驗室的差錯。
4．5．1??不符合技術(shù)規(guī)定的結(jié)果的評定
初始監(jiān)測階段的限值是臨時性的，可能會隨著過程監(jiān)測的進(jìn)展而變化。這時，不符合當(dāng)前限值的結(jié)果可以被看作是真實結(jié)果，反應(yīng)出發(fā)生生物污染時真實的變化，并會促進(jìn)重新評定臨時性技術(shù)規(guī)定。對這種情況不要求作正式的認(rèn)證，但決定應(yīng)該是合理的，并要以文件記錄下來。
4．?6??數(shù)據(jù)認(rèn)證
應(yīng)按明確的規(guī)程認(rèn)證數(shù)據(jù)，然后才可報告。規(guī)程應(yīng)包括：
a)??書面的規(guī)程，由經(jīng)過培訓(xùn)的人員按此對數(shù)據(jù)進(jìn)行審定；
b)??把數(shù)據(jù)輸入計算機(jī)系統(tǒng)時，必須有對照數(shù)據(jù)庫檢查硬盤的規(guī)程；
c)??報告并介紹生物污染結(jié)果的系統(tǒng)；
d)??發(fā)放數(shù)據(jù)報告的明確規(guī)程。
參考文獻(xiàn)
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前言
ISO為全球各國標(biāo)準(zhǔn)化團(tuán)體（ISO會員團(tuán)體）的聯(lián)合會。其國際標(biāo)準(zhǔn)工作的開展一般是由ISO各技術(shù)委員會進(jìn)行，每個會員團(tuán)體，如對技術(shù)委員會的某一課題感興趣，均有權(quán)成為該技術(shù)委員會的代表。任何與ISO保持聯(lián)系的國際組織，無論是政府的，還是非政府的，都可以參加此項工作。ISO與國際電氣技術(shù)委員會（IES）在電氣技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化的各領(lǐng)域進(jìn)行緊密合作。
國際標(biāo)準(zhǔn)草案經(jīng)技術(shù)委員會認(rèn)可后，送各會員團(tuán)體傳閱，以待表決。草案作為國際標(biāo)準(zhǔn)頒布至少需要75%的會員罷休對其投贊成票。
國際標(biāo)準(zhǔn)ISO 14698-3由ISO/TC209技術(shù)委員會（潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境）提出。
ISO14698在潔凈室及其相關(guān)受控環(huán)境的總標(biāo)題下，由以下各部分組成：
—-第1部分：暫定標(biāo)題：生物污染控制—總則
—-第2部分：暫定標(biāo)題：生物污染控制—生物污染數(shù)據(jù)的評定和說明
—-第3部分：暫定標(biāo)題：生物污染控制—對載有生物污染的濕性培養(yǎng)基或生物膜之惰性表面進(jìn)行清洗和/或消毒過程的效率測量方法
用戶注意，第1到第3部分的標(biāo)題是出版第1部分時采用的工作標(biāo)題。如果其中一項或多項標(biāo)準(zhǔn)被從工作計劃中刪除，則需對其余的標(biāo)題重新加以編號。
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引言
本ISO標(biāo)準(zhǔn)是說明以實驗室法測試清洗或消毒操作效率的導(dǎo)則，可以單項操作或多項操作并用的方式應(yīng)用于惰性材料表面，這是指模擬在現(xiàn)場實際粒子分布條件下，被污染利帶有微生物(可能形成生物膜)的潮濕表面，這些方法最終應(yīng)用于每一項產(chǎn)品和操作。本標(biāo)準(zhǔn)可應(yīng)用于上述應(yīng)用領(lǐng)域工業(yè)部門內(nèi)各締約方(供貨商和用戶)之間的合同關(guān)系中。
本標(biāo)準(zhǔn)不同于其它以病菌載體法測量接觸殺菌劑活性的標(biāo)準(zhǔn)，也不同于說明表面懸浮消毒過程活性測量方法的標(biāo)準(zhǔn)，例如噴霧。應(yīng)理解到上述標(biāo)準(zhǔn)是闡述測量產(chǎn)品內(nèi)在活性的技術(shù)(雖然上述第2類標(biāo)準(zhǔn)中涉及氣溶膠發(fā)生器)，但本標(biāo)準(zhǔn)評估測量下列一種或數(shù)種活性綜合效應(yīng)的方法，例如：
a)漂洗；
b)清洗；
c)消毒：
d)清洗與消毒同時采用：
e)生化作用；
g)機(jī)械作用。
本標(biāo)準(zhǔn)一般允許對一種過程采用一種方法識別(必要時)，此過程足指微生物以特定方法被清除和清洗的過程，也是指對培養(yǎng)基和培養(yǎng)基中含有的微生物被清除和清洗的過程，其它有關(guān)設(shè)備清洗和消毒的測量方法業(yè)已公布，其中有些已列入?yún)⒖嘉墨I(xiàn)，可作進(jìn)一步查閱。
1??范圍
本ISO標(biāo)準(zhǔn)用于檢驗與下列一種或數(shù)種作用相聯(lián)系的過程，如漂洗、清洗、消毒，清洗和消毒兼用、生化作用、機(jī)械作用等。本標(biāo)準(zhǔn)闡明在潔凈室和相關(guān)受控環(huán)境，對微生物繁殖污染(無論是否形成生物膜)的潮濕表面，進(jìn)行漂洗：和／或清洗：和／或消毒：和／或清洗、消毒兼用處理過程的效率測量原理。
在相應(yīng)的場合下，IS014698的本部分可延伸與IS014698系列的其它標(biāo)準(zhǔn)及其附錄配合使用。
2??規(guī)定參考文獻(xiàn)
在本國際標(biāo)準(zhǔn)中列入本文參考文獻(xiàn)的多項條款，也被下列標(biāo)準(zhǔn)所采納．在出版時，應(yīng)注明其有效版本。對所有標(biāo)準(zhǔn)均要加以檢查，應(yīng)鼓勵各國際標(biāo)準(zhǔn)協(xié)議參與或?qū)で笫褂酶掳姹镜南铝袠?biāo)準(zhǔn)的可能性。IEc和ISO組織成員應(yīng)保存現(xiàn)行有效的國際標(biāo)準(zhǔn)登錄本。
IS0862：1984??表面活性劑——詞匯
3??定義
在本標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)，對微生物領(lǐng)域通用術(shù)語和表達(dá)式不再重新定義。應(yīng)用本國際標(biāo)準(zhǔn)時，采用下列定義：
3．1??生物膜(biofilm)
封閉在外微孔聚合物內(nèi)的微生物群體，并粘附在表面上。
注：生物膜會在非滅菌條件下，處理有機(jī)物質(zhì)的房間、設(shè)備和機(jī)器的潮濕表面上繁殖（即在醫(yī)藥、航天、或食品工廠、醫(yī)院、廚房、水管、通風(fēng)管道等處)。
3．2效率(efficiency)
清洗消毒的效率，或是單獨(dú)或綜合發(fā)揮這些作用的過程效率，它以10為底的對數(shù)表示的初始值與最終值的分離濃度之比(參閱3．7)，效率用E表示。
注：效率為無量綱，是數(shù)量級的相減數(shù)，也就是10的指數(shù)的濃度。
實例：
3. 3??清洗(cleaning)
對表面污染實施清除、溶解或驅(qū)散的作用。
注：可采用下列1種或數(shù)種方式實施清洗：
——物理化學(xué)的(洗滌作用)
——化學(xué)的(如氫氧化鈉)
——生化的(如酶)
——物理的(如用刷子刷或水管沖洗所產(chǎn)生的剪叨力)
3．4??過程(Proass)
為達(dá)到一定效果而規(guī)定的一組同時或順序?qū)嵤┑牟僮鳌?/p>
注：本標(biāo)準(zhǔn)用檢查下列一種或數(shù)種活動有關(guān)的過程：沖洗，清洗,消毒，清洗和消毒兼用，生化作用和機(jī)械作用。
3．5??沖洗(rinsing)
利用液體，一般是水實施清洗作用
3．6??培養(yǎng)基(soiling)
在某些場合是溶解培養(yǎng)基的作用。
注：?本標(biāo)準(zhǔn)僅考慮濕培養(yǎng)基，培養(yǎng)基含有的有機(jī)物質(zhì)，僅有對微生物富有營養(yǎng)的物質(zhì)組成，并在水的活動呈現(xiàn)時，能使微生物繁殖。
3．7??示蹤劑(tracer)
用于測量培養(yǎng)基繁殖數(shù)量的基材或有機(jī)微生物。
注l：為了測量過程的效率，在培養(yǎng)基中己繁殖的有機(jī)微生物，無論其是否形成生物膜，均可作為示蹤劑。
注2：通過清洗，沖洗的作用和生化或機(jī)械作用清除培養(yǎng)基或生物膜．消毒的目的限定為去除有機(jī)微生物或使有機(jī)微生物失去活性．因此，最理想的是在過程的整個效率方面，測量清除作用所產(chǎn)生的效率，以便與破壞(消滅)作用區(qū)別開來。為此，可選用一種或多種附加示蹤劑，包括天然存在于培養(yǎng)基中或添加進(jìn)去，但應(yīng)不易被消除的示蹤劑．
4??測試方法
4．1??通則
本標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用可分成下列各階段
4．1．1??測試培養(yǎng)基的應(yīng)用和(選項)生物膜的形成
可將含有有機(jī)物和具有下列特性的培養(yǎng)基，以常規(guī)的和可重復(fù)的方式放置在測試表面上：
a)??測試培養(yǎng)基與被考察活動的現(xiàn)場或應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)的滋生床相類似。
b)??測試培養(yǎng)基含有實用的微生物群落標(biāo)本，并能繁殖或形成生物膜。必要時，測試培養(yǎng)基將含有一種或多種附加示蹤劑。
c)??如有必要時，測試培養(yǎng)基可含有用于測量清洗效率的一種或多種附加示蹤劑。
d)??培養(yǎng)劑沉積后，在代表相應(yīng)使用場所的溫度和相對濕度的條件下，隨著時間的推移，應(yīng)在培養(yǎng)基表面被孵化，進(jìn)而使有機(jī)微生物繁殖并(有選擇地)粘附在表面并在合成的外微孔聚合物上，形成生物膜。
4．1．2過程的實施
應(yīng)采用與實際場所完全相同的方式實施此過程，必要時，可停止有機(jī)微生物的破壞，即刻實施該過程，但要采用中和劑。采用適當(dāng)?shù)募夹g(shù)措施，中和劑對被用的每種有機(jī)微生物應(yīng)予先被認(rèn)證。同時在執(zhí)行測試的相同期間應(yīng)重復(fù)被認(rèn)證。認(rèn)證的結(jié)果應(yīng)列入測試報告。
4．1．3??示蹤劑的計數(shù)
在示蹤劑由表面上除下來之后，采用一種或多種被認(rèn)證的技術(shù)對一種或多種示蹤劑進(jìn)行計數(shù)(尤其是在測試培養(yǎng)基上有機(jī)微生物或形成的生物膜。
4．2??測試設(shè)備和儀表
4．2，l??通用設(shè)備和儀表
在本文中對微生物學(xué)中通用的設(shè)備和儀表不再加以說明。
4．2．2??測試培養(yǎng)基
測試培養(yǎng)基應(yīng)具有相應(yīng)使用場所的代表性，并能以最簡便的方式得到實現(xiàn)。例如，在檢驗肉類加工工業(yè)的清洗過程時，便采用肉糜；在乳酪工廠，便采用可溶解于相應(yīng)溶液中的乳酪。
4．2．3??測試培養(yǎng)基粘附器
測試培養(yǎng)基所采用的設(shè)備應(yīng)為用戶提供下列可能性：
——控制單位表面所承受的培養(yǎng)劑質(zhì)量
——可正常復(fù)制單位表面的上述質(zhì)量
如果采用液體測試培養(yǎng)基，應(yīng)使表面復(fù)蓋均勻的厚度。如果采用非液體測試培養(yǎng)基．則應(yīng)在恒速恒壓的條件下涂復(fù)表面。
4．2．4??微生物生物膜示蹤劑????，
為了測量過程效率，可采用在測試培養(yǎng)基中繁殖的有機(jī)微生物，或己形成的生物膜，在任何情況下，這些有機(jī)微生物應(yīng)：
——在相應(yīng)應(yīng)用場所具有代表性：
——應(yīng)取自與被檢的過程相適應(yīng)的那種類型的表面：
——在測試培養(yǎng)基中均質(zhì)擴(kuò)散
微生物示蹤劑可由一種或數(shù)種菌類或菌株組成。如果采用正式清單中未列出的菌株，則應(yīng)將其存放在測試實驗室內(nèi)。
4．2．5清洗示蹤劑
為了測量清洗作用對過程所產(chǎn)生的全部效率，可選用下列各項：
a)天然存在于培養(yǎng)基中的組成成份，采用與其相適應(yīng)的測量技術(shù)；
b)添加入測試培養(yǎng)基中的物質(zhì)(例如放射性指示劑)：
c)孢子狀有機(jī)微生物，優(yōu)先采用親溫細(xì)菌，例如硬脂親溫桿菌；
示蹤劑均質(zhì)地擴(kuò)散于測試培養(yǎng)基中。
4. 2. 6??表面
污染表面的材料應(yīng)與現(xiàn)場評估過程中所采用的表面材料相一致。試樣的大小應(yīng)與選用的測試培養(yǎng)基粘附器相適應(yīng)，并要相當(dāng)小，便于裝進(jìn)超聲處理槽（參閱4.2.8）內(nèi)。將試樣并列排放在平整的表面上。受檢驗的測試表面，即試樣的基片要既無裂縫，又不粗糙不平，不妨礙測試培養(yǎng)基的平滑應(yīng)用。
4．2．7??培養(yǎng)箱
培養(yǎng)箱應(yīng)是調(diào)溫的，并能調(diào)節(jié)基相對濕度。還可采取適當(dāng)手段使測試箱中的空氣受到水蒸汽飽和處理。
4. 2. 8??計數(shù)示蹤劑的回收
示蹤劑量的回收技術(shù)應(yīng)可以重復(fù)實施的。既能保證全部示蹤劑的回收，也可做到其已知劑量和恒定比例的回收。
如果可以的話，可采用超聲處理槽將測試培養(yǎng)劑從計數(shù)表面上分離下來。注意，但必須精確了介超聲處理槽：
——一個或多個超聲源的位置；
——建議采用既適用于超聲處理槽，又適用于放置試樣表面的容器的液體；
——建議采用適宜于上述容器的材料組分。
4．3??程序測試包括下列各步驟
選定的測試培養(yǎng)基與予期在測試中繁殖的有機(jī)微生物和選定的示蹤劑都要均勻混合。
4．3．2??測試培養(yǎng)基在測試表面上的涂復(fù)
采用粘附器將測試培養(yǎng)基均勻地涂復(fù)在試樣表面及基片上(參閱4．2．3)。均勻的涂復(fù)層既可用稱量涂復(fù)前后的試樣的方式鑒別，也可用肉眼檢查培養(yǎng)基表面的方式加以鑒別。
4．3．3??生物膜的孵化和形成試樣及其基片應(yīng)在適宜有機(jī)微土物生長和生物膜形成的溫度和相對濕度的條件下，孵化一段時間，此處的有機(jī)微生物是指予期在測試中需要繁殖的品種或形成生物膜。
4．3．4??測試過程的實施
試樣及其基片經(jīng)孵化后要經(jīng)受測試過程。必要時，要利用中和劑停止滅菌劑的活化，隨后立即實施操作過程。將試樣毫不延誤地送至實驗室逆行分聽。
4．3??示蹤劑的計數(shù)
要采用有效的拄術(shù)對示蹤劑講行計數(shù)。
將示蹤劑從測試表面上分離下來之后，便可對示蹤劑進(jìn)行計數(shù)。在此情況下，應(yīng)將試樣表面送至實驗室，就在實驗室內(nèi)得到繁殖的或形成生物膜的有機(jī)微生物連同示蹤劑，以適當(dāng)?shù)姆绞揭黄鸱蛛x下來。例如，將有機(jī)微生物浸入超聲處理槽內(nèi)的回收液罐內(nèi)，即可回收有機(jī)微生物，事先應(yīng)對選定的分離方法進(jìn)行論證，確定該方法對此類有機(jī)微生物無不良影響，并確信采用這種分離方法，能恰當(dāng)?shù)厥谷坑袡C(jī)微生物從表面上分離下來。
4．4??結(jié)果的表達(dá)
按照測得的效率表達(dá)測試結(jié)果，依據(jù)測試狀況，該效串為：
a)過程效率——利用選定繁殖或形成生物摸的微生物示蹤劑測得(參閱4．2．4)
b)??清洗效率——采用清潔示蹤刑法測得：
c)??滅菌效串——過程效率和清洗效率之差異，
4．5??測試報告
應(yīng)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)編制記錄報告，該報告至少應(yīng)包括下列各部分內(nèi)容：
a)實驗室的鑒定：
b)過程的說明；
1)所用產(chǎn)品的名稱；
2)使用模式：
c)實驗條件，特別要說明全部細(xì)節(jié)：
1)測試用培養(yǎng)劑：
2)有機(jī)微生物；
3)示蹤劑：
4)測試表面(材料和表面條件，試樣尺寸，培養(yǎng)基大小)，
5)培養(yǎng)劑技術(shù)及其重復(fù)性(單位表面的質(zhì)量，外觀)：
6)孵化（時間、溫度、相對濕度)：
7)計數(shù)技術(shù)，必要時，還包括有效的回收示蹤劑技術(shù)：
8)測試完成時要采取滅菌劑中和處理，但也要適合測試條件：
d)結(jié)果：
e)下列短浯：“讀者注意到這一事實，此處所列各項測試結(jié)果只能與在嚴(yán)格同條件下所取得的測試結(jié)果相對照”；
f)結(jié)論：
e)日期和簽署：
參考書目錄
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原文鏈接：http://m.gxshunjiang.com/cleanroom-standards/wcsjcbz/723.html
